第 15 课时 血红蛋白的提取和分离[学习导航] 1.通过阅读教材 P64“基础知识”，掌握蛋白质分离的方法凝胶色谱法的原理、缓冲液的制备及作用和蛋白质纯度鉴定的方法电泳法的原理。2.分析教材 P66“实验操作”，掌握蛋白质提取和分离的过程。3.阅读教材 P69“操作提示”，掌握蛋白质分离过程中需注意的问题。[重难点击] 1.尝试提取和分离血液中的血红蛋白，体验提取生物大分子的基本过程和方法。2.了解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子方法的基本原理。一、蛋白质的分离技术1.蛋白质的分离依据根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。2.凝胶色谱法(1)概念：也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。(2)凝胶的特点(3)常用凝胶：葡萄糖或琼脂糖。(4)分离原理① 相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢，通过凝胶的时间较长。② 相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快，通过凝胶的时间较短。3.缓冲溶液(1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液 pH 的影响，维持 pH 基本不变。(2)配制：通常由 1～2 种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同 pH 范围内使用 的缓冲液。(3)意义：为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程，保持体外溶液的 pH 与体内环境中的 pH 基本一致。4.电泳(1)概念：带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。(2)原理① 带电粒子：许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的 pH下，这些基团会带上正电或负电。② 迁移动力与方向：在电场的作用下，带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。③ 分离依据：电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子本身的大小、形状的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，从而实现样品中各种分子的分离。(3)常用的电泳方法：琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳。1.凝胶色谱法(1)结合上图，根据凝胶色谱法的分离原理，填表分析不同大小的分子洗脱后的次序。相对分子质量大相对分子质量小直径大小较大较小运动方式垂直向下运动无规则的扩散运动运动路程较短较长运动速度较快较慢洗脱次序先流出后流出(2)结合上图，分析为什么相对分子质量较大的蛋白质...
