第 15 课时 血红蛋白的提取和分离[学习导航] 1
通过阅读教材 P64“基础知识”,掌握蛋白质分离的方法凝胶色谱法的原理、缓冲液的制备及作用和蛋白质纯度鉴定的方法电泳法的原理
分析教材 P66“实验操作”,掌握蛋白质提取和分离的过程
阅读教材 P69“操作提示”,掌握蛋白质分离过程中需注意的问题
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尝试提取和分离血液中的血红蛋白,体验提取生物大分子的基本过程和方法
了解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子方法的基本原理
一、蛋白质的分离技术1
蛋白质的分离依据根据蛋白质各种特性的差异,如分子的形状和大小、所带电荷的性质和多少、溶解度、吸附性质和对其他分子的亲和力等,可以用来分离不同种类的蛋白质
凝胶色谱法(1)概念:也称做分配色谱法,是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法
(2)凝胶的特点(3)常用凝胶:葡萄糖或琼脂糖
(4)分离原理① 相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道,路程较长,移动速度较慢,通过凝胶的时间较长
② 相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道,只能在凝胶外部移动,路程较短,移动速度较快,通过凝胶的时间较短
缓冲溶液(1)作用:在一定范围内,缓冲溶液能够抵制外界的酸和碱对溶液 pH 的影响,维持 pH 基本不变
(2)配制:通常由 1~2 种缓冲剂溶解于水中配制而成
调节缓冲剂的使用比例就可以制得在不同 pH 范围内使用 的缓冲液
(3)意义:为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程,保持体外溶液的 pH 与体内环境中的 pH 基本一致
电泳(1)概念:带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程
(2)原理① 带电粒子:许多重要的生物大分子,如多肽、核酸等都具有可解离的基团,在一定的 pH下,这些基团会带上正电或负电
② 迁移动力与方向:在电场的作用下,带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动