DNA 的粗提取与鉴定一、实验原理1．提取思路：利用 DNA 与 RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，提取DNA，去除其他成分。2．提取原理(1)DNA 的溶解性：①DNA 和蛋白质等其他成分在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐浓度就能使 DNA 充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离的目的。②DNA 不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则可溶于其中。(2)DNA 对酶、高温和洗涤剂的耐受性：① 蛋白酶能水解蛋白质，但对 DNA 没有影响。② 大多数蛋白质不能忍受 60～80 ℃的高温，发生变性，而 DNA 在 80_℃以上才会变性。③ 洗涤剂能够瓦解细胞膜，但对 DNA 没有影响。3．鉴定原理：DNA＋二苯胺沸水浴,蓝色。二、实验操作1．实验材料的选取选用 DNA 含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大。2．破碎细胞，获取含 DNA 的滤液(1)动物细胞的破碎(以鸡血为例)：在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。(2)植物细胞的破碎(以洋葱为例)：先将洋葱切碎，然后加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分地搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。3．去除滤液中的杂质(1)方案一：通过控制 NaCl 溶液 的浓度去除杂质。(2)方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应 10～15 min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 1.DNA 在 0.14 mol/ L NaCl 溶液中溶解度最低。2．DNA 不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，可利用酒精将DNA 和蛋白质分开。3．DNA 对蛋白酶、高温和洗涤剂有耐受性。4．在加热条件下，DNA 遇二苯胺会被染成蓝色。5．哺乳动物成熟的红细胞不含细胞核，不能作为提取 DNA 的实验材料。若选取肝脏细胞或植物细胞，则必须充分研磨。6．鸡血中加入柠檬酸钠可防止血液凝固。7．用玻璃棒搅拌时，动作要轻缓且沿同一个方向进行，以免加剧 DNA 分子的断裂。(3)方案三：将滤液放在 60 ～ 75 _℃的恒温水浴箱中保温 10～15 min，使蛋白质变性而与DNA 分离。4．DNA 的析出在滤液中加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液，静置 2～3 min，溶液中会出现白色丝状物，用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物。5．DNA 的鉴定将呈白色丝状的 DNA 溶解于 5 mL 物质的量浓度为 2 mol/L 的 NaCl 溶液中，再加入 4 mL的二苯胺试剂，沸水中加热 5 min，冷却后观察溶液的颜色，注意要同时设置对照实验。三、操作提示1．以血液...
