多聚酶链式反应扩增 DNA 片段 一、PCR 技术的原理1．细胞内 DNA 复制的条件[填表]原料4 种脱氧核苷酸模板2 条 DNA 的母链酶解旋酶和 DNA 聚合酶 引物使 DNA 聚合酶能够从引物的 3′ 端 开始连接脱氧核苷酸2．PCR 扩增的原理及条件(1)概念：PCR 即多聚酶链式反应，是一种体外迅速扩增 DNA 片段 的技术
(2)原理：① 子链的合成：DNA 聚合酶只能从 3′端延伸 DNA 链，因此，DNA 复制需要引物，DNA 合成的方向总是从子链的 5′端向 3′端延伸
② 双螺旋的打开：DNA 的热变性原理，即：
(3)条件：DNA 模板、分别与两条模板链相结合的两种引物、四种脱氧核苷酸、耐热的DNA 聚合酶、一定的缓冲溶液以及能自动调控温度的设备
二、PCR 的反应过程三、PCR 技术的实验操作1
DNA 聚合酶不能从头开始合成 DNA，只能从 3′端延伸 DNA 链，因此，DNA 的合成方向总是从子链的 5′端向 3′端延伸
2．PCR 反应需要 DNA 模板、两种引物、四种脱氧核苷酸、耐热的DNA 聚合酶等条件
3．PCR 利用了 DNA 的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合
4．PCR 每次循环都包括变性、复性和延伸三步
5．DNA 聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的 DNA 序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增
1．实验用具(1)PCR 仪：该仪器能自动调控温度，实现 DNA 的扩增
如果没有 PCR 仪，可用 3 个恒温水浴锅代替，操作时按程序在 3 个水浴锅中来回转移 PCR 反应的微量离心管
(2)微量离心管：总容积为 0
5 mL，实际上是进行 PCR 反应的场所
(3)微量移液器：用于向微量离心管中转移 PCR 配方中的液体
2．注意事项(1)为避免外源 DNA 等因素的污染，实验中使用的一些用具在使用前必须进行高压
