多聚酶链式反应扩增 DNA 片段 一、PCR 技术的原理1．细胞内 DNA 复制的条件[填表]原料4 种脱氧核苷酸模板2 条 DNA 的母链酶解旋酶和 DNA 聚合酶 引物使 DNA 聚合酶能够从引物的 3′ 端 开始连接脱氧核苷酸2．PCR 扩增的原理及条件(1)概念：PCR 即多聚酶链式反应，是一种体外迅速扩增 DNA 片段 的技术。(2)原理：① 子链的合成：DNA 聚合酶只能从 3′端延伸 DNA 链，因此，DNA 复制需要引物，DNA 合成的方向总是从子链的 5′端向 3′端延伸。② 双螺旋的打开：DNA 的热变性原理，即：。(3)条件：DNA 模板、分别与两条模板链相结合的两种引物、四种脱氧核苷酸、耐热的DNA 聚合酶、一定的缓冲溶液以及能自动调控温度的设备。二、PCR 的反应过程三、PCR 技术的实验操作1.DNA 聚合酶不能从头开始合成 DNA，只能从 3′端延伸 DNA 链，因此，DNA 的合成方向总是从子链的 5′端向 3′端延伸。2．PCR 反应需要 DNA 模板、两种引物、四种脱氧核苷酸、耐热的DNA 聚合酶等条件。3．PCR 利用了 DNA 的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解聚与结合。4．PCR 每次循环都包括变性、复性和延伸三步。5．DNA 聚合酶只能特异地复制处于两个引物之间的 DNA 序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。1．实验用具(1)PCR 仪：该仪器能自动调控温度，实现 DNA 的扩增。如果没有 PCR 仪，可用 3 个恒温水浴锅代替，操作时按程序在 3 个水浴锅中来回转移 PCR 反应的微量离心管。(2)微量离心管：总容积为 0.5 mL，实际上是进行 PCR 反应的场所。(3)微量移液器：用于向微量离心管中转移 PCR 配方中的液体。2．注意事项(1)为避免外源 DNA 等因素的污染，实验中使用的一些用具在使用前必须进行高压灭菌。(2)所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在－ 20 ℃储存。(3)在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头必须更换。四、DNA 含量的测定1．原理：利用 DNA 在 260_nm 的紫外线波段的吸收峰曲线来测定相应含量。2．计算公式DNA 含量(μg/mL)＝50×(260_nm 的读数)×稀释倍数。1．PCR 技术控制 DNA 的解聚与结合是利用了 DNA 的( )A．特异性 B．稳定性C．热变性 D．多样性解析：选 C DNA 分子在 80～100 ℃的温度范围内变性，双链解开成单链；当温度缓慢降低时，又能重新结合形成双链。2．标准的 PCR 过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需...
