第一节 蛋白质的提取和分离1．了解提取生物大分子的基本思路和方法。2．尝试蛋白质的提取。一、蛋白质分离提纯技术将生物体内的蛋白质提取出来并加以分离，就可以得到高纯度的甚至是单一种类的蛋白质。1．蛋白质分离提纯技术包括离心技术、层析技术和电泳技术等。其中，电泳技术最为快捷灵敏、简便易行。2．电泳原理蛋白质含有游离的氨基和羧基，是两性电解质，在一定 pH 条件下带有电荷。作为带电粒子，蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷相反的电极方向移动，这就是电泳现象。蛋白质所带的电荷数越多，移动得越快；电荷数相同时，相对分子质量越小，则移动越快。3．不同蛋白质的混合溶液，在经过同一个电场电泳后，会在凝胶上形成不同的带纹。每一种带纹可能就是一种蛋白质。将这些带纹一个一个地剪下来，分别予以洗脱，然后对洗脱液中的蛋白质做进一步的分离。如果待测洗脱液不能再分离，则这个带纹中很可能含有一种单纯蛋白质。如果待测洗脱液还能再分离，则这个带纹中含有多种蛋白质，需要作进一步分离，直至提纯。二、血清蛋白的提取和分离1．新鲜血液在体外凝固后，会析出清亮的淡黄色液体——血清。血清中含有丙种球蛋白、凝集素等多种蛋白质。2．过程（1）点样：取新制血清与蔗糖溶液及溴酚蓝指示剂等体积混匀后，小心加到电泳样品槽的胶面上。（2）电泳。（3）染色：取出凝胶，放入考马斯亮蓝 R250染色液中。染色与固定同时进行，使染色液没过胶板，染色 30 min。（4）脱色：用醋酸溶液浸泡漂洗数次，每隔 1～2 h 更换脱色液，直至底色脱净，背景清晰。（5）制干胶板：将已脱色的凝胶板放在保存液中浸泡 3～4 h，然后放在两层透气玻璃纸中间，自然干燥即可获得血清蛋白的电泳谱带。三、其他蛋白质的提取与分离1．牛奶中酪蛋白的提取与检测当 pH＝4.8 时，酪蛋白的溶解度降低，并析出沉淀。用酒精除去酪蛋白沉淀中的脂肪后，即得到纯的酪蛋白。酪蛋白中含有酪氨酸，能与米伦试剂起颜色反应，首先生成白色沉淀，加热后变成红色。2．卵清蛋白质的分离选取鸡、鸭、鹅、鹌鹑等动物的新鲜卵清作实验材料。采用电泳法分离卵清蛋白质。思考：可否利用蛋白质的提取与分离技术快速诊断早期癌变？提示：可以。只需从早期患者的尿液、血液或细胞裂解液中提取少量蛋白质样品，采用蛋白质指纹图谱技术，就可以更加快速、简便、准确地对细胞癌变作出诊断。1．电泳许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的 pH...
