环状RNAhsa_circ_0000400在原发性结肠癌中的表达水平及其临床诊断意义摘要：目的：探讨结肠癌患者血清中环状RNAhsa_circ_0000400的表达水平及临床诊断意义，以及hsa_circ_0000400作为结肠癌诊断生物标志物的可行性。方法：培养结肠癌标准细胞株SW480,LOVO与正常人结肠粘膜上皮细胞株HCoEpiC，选取常熟市第二人民医院收治的结肠癌患者肿瘤组织56例，相应癌旁组织56例，结肠癌患者血清78例，同期健康体检者血清78例，采用实时定量反转录聚合酶链反应（qRT-PCR）技术检测结肠癌标准细胞株SW480,LOVO与正常人结肠粘膜上皮细胞株HCoEpiC，结肠癌肿瘤组织及相应癌旁组织，以及结肠癌患者与健康人血清hsa_circ_0000400相对表达水平，并结合患者年龄、性别、临床分期、是否有淋巴结转移等临床病理特征综合分析。用受试者工作特征曲线（ROC）评价hsa_circ_0000400对于结肠癌的诊断效能。结果：结肠癌标准细胞株LOVO，SW480中的hsa_circ_0000400相对表达量明显高于人正常结肠上皮细胞株HCoEpiC，差异具有统计学意义（P<0.05）。结肠癌患者肿瘤组织中hsa_circ_0000400的相对表达量升高，明显高于对应的癌旁组织，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结肠癌患者血清中hsa_circ_0000400的相对表达量明显高于健康人血清，差异有统计学意义（P<0.05），hsa_circ_0000400表达与肿瘤TNM分期，分化程度及是否有淋巴结转移均有关（均P<0.05），而与患者性别、年龄、原发部位、肿瘤大小等均无关（均P>0.05）。单独使用hsa_circ_0000400作为诊断标志物时，ROC曲线下面积0.888，临界值为4.185，敏感性0.833，特异性0.808。hsa_circ_0000400联合CA19-9作为诊断标志物时，ROC曲线下面积增加至0.945，敏感性0.833，特异性0.974。结论：hsa_circ_0000400可作为一种新的结肠癌诊断生物学标志物，与CA19-9联合检测，在结肠癌的诊断中起到一定的价值。结肠癌（colorectalcancer,CRC）是最常见消化道的恶性肿瘤之一，多好发于乙状结肠与直肠交汇处，近年来,结肠癌的发病率与死亡率逐渐上升，尽管结肠癌的临床诊疗技术取得了重大进展,但由于其早期症状不明显，依靠临床症状诊断并不能在第一时间发现肿瘤。而寻常的诊断方法如CT,MRI，X线，CEA,CA19-9等特异性较差，不能第一时间判断结肠癌的相关情况，因此有必要寻找一种新的生物学标志物，探索影响结肠癌进展的机制。环状RNA是一种拥有独特环状结构的内源性非编码RNA，circRNA没有5’端帽子和3’端poly(A)尾，通过共价键形成闭合的环状结构，使它能够耐受RNA酶的降解，因此circRNA极其稳定。此外，circRNA在不同物种中具有高度的保守性，其大量存在细胞质中，且在血液、唾液、外泌体中也能检测到丰富的circRNA，近年来越来越多的研究证实,circRNA与肿瘤的发生发展有关,并在肿瘤进展过程中能够发挥重要的作用。这种特性使得circRNA成为较理想的疾病诊断的生物标志物。本研究参考了目前已发表的circRNA，并结合circRNA数库circBase，选定了与结直肠癌相关的一种circRNA分子，即hsa_circ_0000400。旨在研究结肠癌组织、标准结肠癌肿瘤细胞株以及结肠癌病人血清中的表达情况与其对照组的表达差异，并验证其作用机制，探讨其成为新的结肠癌诊断生物学标志物的可行性。1.材料与方法1.1临床标本1.1.1组织标本：收集常熟市第二人民医院普外科2016年1月至2019年12月收治的56例结肠癌患者，所有患者未经化疗、放疗或靶向药物治疗。每例标本分别取癌组织及癌旁正常组织（距离癌组织3厘米），组织标本取出后用TRIzol浸泡后立即放入-80℃冰箱保存。患者病理切片均经常熟市第二人民医院病理科专家诊断为结肠癌，有完整的临床病理记录。56例病例中，男31例，女25例；年龄小于60岁21例，大于等于60岁35例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期14例，Ⅲ～Ⅳ期42例；高、中分化41例，低分化15例。所有患者在获取标本前，均已签署患者知情同意书。1.1.2血液标本：收集常熟市第二人民医院普外科2018年1月至2020年10月收治确诊的78例结肠癌患者，78例病例中，男42例，女36例；年龄小于60岁32例，大于等于60岁46例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期25例，Ⅲ～Ⅳ期53例；高、中分化52例，低分化26例。所有患者均未接受过任何治疗...
