基因工程的基本工具和操作程序一、考纲等级要求A级二、考点要求1、分析基因工程研究的理论基础2、说出DNA重组技术所需的三种基因工具的作用3、简述基因工程基本操作程序的四个步骤4、简述目的基因的获取、运载体的构建、目的基因的导入与检测等常用的方法及原理三、复习过程基因工程的基本工具和操作程序一、基因工程的四步骤：、、、1、目的基因的获取说出获取目的基因的方法（1）基因文库例1：下列属于基因文库的有：A、基因库B、基因组文库C、部分基因库D、部分基因文库（2）PCR技术①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术②原理：__________③条件：_______________________、_______________、___________(做启动子)、___________。④方式：以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）⑤结果：使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增⑥过程：a、DNA变性（90℃-96℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成___________b、退火（复性25℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA模板结合，形成局部________。c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，从引物的5′端→3′端延伸，合成与模板互补的______例2：在采用常规PCR方法扩增目的基因的过程中，使用的DNA聚合酶不同于一般生物体内的DNA聚合酶，最主要的特点是：A、专一性B、高效性C、热稳定性D、受PH值影响（3）获取目的基因的工具——限制性核酸内切酶来源：主要是从中分离纯化出来的。功能：能够识别双链DNA分子的某种核苷酸序列，并且使每一条链中部位的两个核苷酸之间的断开，因此具有性。大多数限制酶的识别序列由个核苷酸组成。末端：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：和。前者是限制酶在它识别序列的将DNA的两条链切开产生的，后者是限制酶在它识别序列的切开产生的。例3：由同一种限制性核酸内切酶切割成的黏性末端是①TCG②AATTCGA③CA④AGCTTC⑤AATTCGAAGCTTAAGCTGTTCCAAGAGCTA、①②B、①③C、①④D、②③E、①⑤2、基因表达载体的构建——核心（1）工具①载体载体具备的条件：例4：转基因工程的运载体必须具备的条件是A．能在宿主细胞中复制并保存B．具有多个限制酶切点，以便与外源基因连接C．具有标记基因，便于进行筛选D．是环状形态的DNA分子载体的种类：例5：下列哪些可作为基因工程技术中常用的“分子运输车”A．大肠杆菌B．质粒C．动物病毒D．线粒体E、植物病毒F、动物病毒u②限制性核酸内切酶③DNA连接酶例6：在基因工程中，切割运载体和含有目的基因的DNA片段，需使用（）A.同种限制酶B.两种限制酶C.同种连接酶D.两种连接酶（2）基因表达载体的组成例7：下列是基因表达载体组成必须的有A、目的基因B、启动子C、终止子D、标记基因E、抗生素基因例8：由于质粒与目的基因具有的黏性末端，结合过程中可能出现下列哪种情况A、形成环状的外援DNAB、可能形成环状的运载体DNAC、可能形成重组DNAD、只出现重组DNA3、将目的基因导入受体细胞生物种类植物动物微生物常用方法受体细胞转化过程4、目的基因的检测与鉴定检测是否导入检测是否转录检测是否翻译鉴定是否正确例9：目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定关键步骤的是A．检测受体细胞是否有目的基因B．检测受体细胞是否有致病基因C．检测目的基因是否转录mRNAD．检测目的基因是否翻译蛋白质DNA连接酶的种类连接末端作用外源基因受体细胞mRNADAN蛋白质方法方法方法性状方法总结：步骤1、基因工程工具2、基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程实质（原理）结果改造方向练习1．目的基因导入受体细胞后，是否可以稳定维持和表达其遗传特性，只有通过鉴定和检测才能知道。下列属于目的基因检测和鉴定关键步骤的是A．检测受体细胞是否有目的基因B．检测受体细胞是否有致病基因C．检测目的基因是否转录mRNAD．检测目的基因是否翻译蛋白质2．下图示一项重要生物技术的关键步骤，字母X可能代表A．不能合成胰岛素的细菌B．能合成抗体的人类细胞C．能合成胰岛素的细菌D．不能合成抗生素的人类细胞...
