薄层色谱法试验VIP免费

薄层色谱法实验1参考文献ChP-2020版通则0502薄层色谱法定义：薄层色谱法系将供试品溶液点于薄层板上，在展开容器内用展开剂展开，使供试品所含成分分离，所得色谱图与适宜的标准物质按同法所得的色谱图对比。2准备工作2.1仪器与材料2.1.1薄层板2.1.1.1分类固定相中可加入黏合剂、荧光剂。硅胶薄层板常用的有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H、硅胶HF254。在保证色谱质量的前提下，可对薄层板进行特别处理和化学改性以适应分离的要求，可用实验室自制的薄层板。图2-1-1-1薄层板分类2.1.1.2薄层板要求1）固定相颗粒大小一般要求粒径为10~40μm。2）玻板应光滑、平整，洗净后不附水珠。图2-1-2-1薄层硅胶板2.1.2点样器一般釆用微升毛细管或手动、半自动、全自动点样器材。图2-2-1全自动点样仪2.1.3展开容器上行展开一般可用适合薄层板大小的专用平底或双槽展开缸，展开时须能密闭。水平展开用专用的水平展开槽。图2-1-3-1高硼硅玻璃层析缸（左侧双槽，右侧单槽）2.1.4显色装置1）喷雾显色应使用玻璃喷雾瓶或专用喷雾器，要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；2）浸渍显色可用专用玻璃器械或用适宜的展开缸代用；3）蒸气熏蒸显色可用双槽展开缸或适宜大小的干燥器代替。图2-4-1三角薄层喷瓶2.1.5检视装置为装有可见光、254nm及365nm紫外光光源及相应的滤光片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄图像用。暗箱内光源应有足够的光照度。图2-5-1BiostepDD70薄层色谱成像系统2.1.6薄层色谱扫描仪系指用一定波长的光对薄层板上有吸收的斑点，或经激发后能发射出荧光的斑点，进行扫描，将扫描得到的谱图和积分数据用于物质定性或定量的分析仪器。图2-1-6-1薄层色谱扫描仪2.2溶剂1）使用的溶剂必须是“分析纯”或“色谱纯”；2）溶剂组成采用体积量比（如正丁醇-冰乙酸-水=4：1：1，V/V/V），或者绝对量（如18ml甲苯+2ml甲醇）。3）配制总量应足以使薄层板的浸入深度约为5mm。可以事先量取展开缸的底座面积×0.5mm得到最少需要的溶剂体积参考值。4）展开剂要求新鲜配制，不要多次反复使用，如需分层，则按要求放置分层后取需要的一相（上层或下层），备用。2.2.1溶剂2.2.1.1溶剂的选择考虑分离成分的极性、溶解度、吸附度。先加入极性较小的溶剂，若不容再加入少量极性大的溶剂一般根据相似相溶原则，需要注意，极性相差大的不混溶。混合溶剂通常使用一个高极性和低级性溶剂组成的混合溶剂。查阅文献，目标化合物适用于什么样的展开剂，可用文献条件作为初始条件测试，根据实际情况进行调整展开剂的配比，直到找到一个分离效果好的展开剂。一般把两种溶剂混合时，采用高极性/低极性的体积比为1/3的混合溶剂,如果有分开的迹象，再调整比例（或者加入第三种溶剂），达到最佳效果；如果没有分开的迹象（斑点较“拖”），最好是换溶剂。2.2.1.2溶剂极性参数表名称介电常数极性2-0.2环已烷1.90.0正已烷2.42.4甲苯2.42.5二甲苯2.32.7苯9.13.1二氯甲烷18.33.9异丙醇1）一般来说，弱极性溶剂体系的基本两相由正己烷和水组成，再根据需要加入甲醇、乙醇，乙酸乙酯来调节溶剂系统的极性，以达到好的分离效果，适合于生物碱、黄酮、萜类等的分离；2）中等极性的溶剂体系由氯仿和水基本两相组成，由甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于蒽醌、香豆素，以及一些极性较大的木脂素和萜类的分离；3）强极性溶剂，由正丁醇和水组成，也靠甲醇、乙醇，乙酸乙酯等来调节，适合于极性很大的生物碱类化合物的分离。2.2.2展开剂2.2.2.1展开剂的选择➢对的所需成分有良好的溶解性；➢可使成分间分开（分离度好）；➢待测组分的Rf在0.2~0.8之间，定量测定在0.3～0.5之间；➢与待测组分或吸附剂不发生化学反应；➢沸点适中，黏度较小；➢展开后组分斑点圆且集中；➢混合溶剂最好用新鲜配制。物质分子化学结构中，通常由较极性部分和非极性部分两部分。例如下面以苯丙烷为极性小部分，随着极性基团部分的增加，总体的极性就增加，展开剂极性也增加了。以下分开讨论不同化合物极性情况及其对应的展开剂。3操作方法3.1薄层板制备3.2点样除另有规定外，在洁净干燥的环境中，用专用毛细管或配合相应的半自动、自动点样器械点样于薄层板...