食品微生物指标检测实验方案微生物学实验方案题班级：时间：1意义食品微生物指标是指某个或某批食品中微生物的存在与否（定性分析）或每个质量、体积、单位面积或每批产品中微生物存在的数目及其毒素（或代谢产物）的限制（定量分析），用以评价食品的微生物学卫生状况及其安全性。在我国食品卫生标准中，通常微生物指标包括菌落总数、大肠菌群、致病菌等的检测，其中菌落总数和大肠菌群是必检项目，致病菌不得检出。食品中微生物菌落总数指食品检样经过处理，在一定的条件下培养后，所得1mL或1g检样中所含菌落的总数，主要作为食品被污染程度的标志，常用倾注平板菌落计数法。大肠菌群是指一群在37℃，24h能发酵乳糖产酸、产气，需氧或兼性厌氧的革兰阴性无芽孢杆菌，它反映了食品是否被粪便污染，同时也间接地指出食品是否有被肠道致病菌污染的可能性，常用的检测方法是最大可能计数法。2目的与要求2.1了解菌落总数、大肠菌群测定在食品卫生评价当中的意义2.2学习并掌握细菌分离和活菌计数的基本方法和原理2.3学习并掌握大肠菌群的检验方法3实验器材3.1食品检样3.2培养基平板计数琼脂培养基：将胰蛋白胨5.0g、酵母浸膏2.5g、葡萄糖1.0g、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL、pH7.0±0.2加于蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH。分装试管或锥形瓶，121℃高压灭菌15min。月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LaurylSulfateTryptose，LST）肉汤：将胰蛋白胨或胰酪胨20.0g、氯化钠5.0g、乳糖5.0g、磷酸氢二钾（K2HPO4）2.75g、磷酸二氢钾（KH2PO4）2.75g、月桂基硫酸钠0.1g、蒸馏水1000mL溶解于蒸馏水中，调节pH为pH6.8±0.2。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压，灭菌15min。煌绿乳糖胆盐（BrilliantGreenLactoseBile，BGLB）肉汤：将蛋白胨10.0g、乳糖10.0g溶于约500mL蒸馏水中，加入牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液200mL（将20.0g脱水牛胆粉溶于200mL蒸馏水中，调节pH至7.0～7.5），用蒸馏水稀释到975mL，调节pH为7.2±0.1，再加入0.1%煌绿水溶液13.3mL，用蒸馏水补足到1000mL，用棉花过滤后，分装到有玻璃小倒管的试管中，每管10mL。121℃高压灭菌15min。3.3试剂与器皿3.3.1试剂无菌生理盐水：称取8.5ｇ氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min。无菌1mol/LNaOH：称取40g氢氧化钠溶于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌15min无菌1mol/LHCl：移取浓盐酸90mL，用蒸馏水稀释至1000mL，121℃高压灭菌15min。3.3.2器皿灭菌锅、恒温培养箱：36℃±1℃、冰箱：2℃～5℃、分析天平、振荡器、恒温水浴箱：46℃±1℃、均质器、无菌吸管：1mL（具0.01mL刻度）、10mL（具0.1mL刻度）或微量移液器及吸头、pH计或pH比色管或精密pH试纸无菌锥形瓶：容量250mL/3个、500mL/3个无菌培养皿：直径90mm，15个试管：30个玻璃小倒管：20个容量瓶：100mL，2个4流程4.1菌落总数4.1.1样品的稀释固体和半固体样品：称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000r/min～*****r/min均质1min～2min，或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min，制成1:10的样品匀液。液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。4.1.2培养待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。4.1.3菌落计数可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表示。选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。4.1.4结果与报告菌落总数的计算方法：若只有一个...
