基因工程的基本操作程序教学课件（详细）VIP免费

基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取1.目的基因：2.获取目的基因的常用方法：（1）从基因文库中获取；（2）利用PCR技术扩增；（3）人工合成主要指的是编码蛋白质的结构基因,也可以是一些具有调控作用的因子。1.1.从基因文库中获取目的基因（序列未知）从基因文库中获取目的基因（序列未知）1)1)基因文库的概念基因文库的概念::将含有某种生物不同基因的许多将含有某种生物不同基因的许多DNADNA片断，导入到受体菌的片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。2)2)基因文库的种类基因文库的种类::基因组文库：基因组文库：含有一种生物的含有一种生物的全部全部基因基因部分基因文库：部分基因文库：只包含了一种生物的只包含了一种生物的部分部分基因，基因，如：如：cDNAcDNA文库文库基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，菌中含基因。基因组文库与部分基因文库的关系3)基因组DNA文库与cDNA文库某生物体内全部DNA许多DNA片段受体菌群体限制酶与运载体连接导入基因组文库cDNA反转录受体菌群体与运载体连接导入cDNA文库某种生物某个时期的mRNA基因的结构非编码区非编码区编码区RNA聚合酶结合位点外显子内含子终止子启动子原核真核原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子①不编码蛋白质；：编码蛋白质,连续不间断。编码区非编码区②调控遗传信息表达,上游有RNA聚合酶结合位点。基因结构真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区内含子外显子启动子终止子编码区上游编码区下游编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列。内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用,上游有RNA聚合酶结合位点(启动子)。与RNA聚合酶结合位点基因结构原核细胞与真核细胞的基因结构比较原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的，边_________边_________编码区是间隔的、_____的，先_____后_____相同点都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的连续不连续编码区非编码转录翻译转录翻译基因文库的构建方法①基因组文库的构建提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶酶切一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接重组载体基因组文库导入受体菌中储存②cDNA文库的构建-----逆转录法：提取某种生物的某器官或特定发育时期的mRNA单链DNA双链cDNA片段重组载体与载体连接cDNA文库反（逆）转录酶DNA聚合酶导入受体菌中储存思考？真核生物的基因用逆转录法得到的cDNA与原基因相同吗？真核细胞的cDNA的获取编码区编码区非编码区非编码区非编码区非编码区DNA聚合酶剪接有关的酶RNA聚合酶mRNA前体mRNA单链DNAcDNA逆转录酶转录剪接逆转录复制启动子启动子终止子基因不含非编码序列。即不含非编码区和内含子基因组文库和部分基因文库的比较基因组文库和部分基因文库的比较文库类型文库类型cDNAcDNA文库文库基因组文库基因组文库文库大小文库大小基因中启动子基因中启动子基因中内含子基因中内含子基因多少基因多少物种间基因交流物种间基因交流小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以怎样从基因文库中得到我们所需的目的基因呢?依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性4)从基因文库中得到目的基因的方法2、利用PCR技术扩增目的基因PCR——聚合酶链式反应是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可获取大量的目的基因。以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）指数2n方式使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增结果原理：DNA双链复制PCR技术•前提：•条件PCR扩增仪一段已知目的基因的核苷酸序列模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）PCR技术的操作过程a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________b、退火（复性55℃-65℃）：系统温度降低，引物与DNA...