基因工程的基本操作程序VIP专享VIP免费

1.2基因工程的基本操作程序根据基因工程的有关知识,回答下列问题:(1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段,其末端类型有_______和________。(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下:AATTC……GG……CTTAA为使运载体与目的基因相连,含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外,还可用另一种限制性内切酶切割,该酶必须具有的特点是__________________。(3)按其来源不同,基因工程中所使用的DNA连接酶有两类,即___________DNA连接酶和_________DNA连接酶。(4)基因工程中除质粒外,_________和______也可作为运载体。（5）作为载体需具备的条件_____________。基因工程培育抗虫棉的简要过程：提取棉花细胞(含抗虫基因)苏云金芽孢杆菌抗虫基因与运载体拼接导入普通棉花(无抗虫特性)棉花植株(有抗虫特性)植物组织培养基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、获取目的基因（？）1.目的基因：（1）编码蛋白质的基因（主要）；（2）具有调控作用的因子2、目的基因的来源：（1）从自然界已有的物种中分离；（2）人工合成3、获取目的基因的方法：（1）从基因文库中获取；（2）PCR技术扩增；（3）化学方法人工合成真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点。非编码序列：包括非编码区和内含子结构基因外显子内含子转录、加工修饰mRNA原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子能转录相应的信使RNA，能编码合成蛋白质非编码区原核细胞的基因结构调控遗传信息表达的核苷酸序列编码区编码区上游编码区下游RNA聚合酶结合位点RNA聚合酶结合位点编码蛋白质调控调控原核细胞真核细胞cDNA:以目的基因转录成的信使RNA为模板，再反转录酶的催化下反转录成互补的单链DNA，然后在DNA聚合酶的作用下合成双链DNA，即cDNA，从而获得所需的基因。思考：cDNA与DNA在结构上的区别？1.从基因文库中获取目的基因基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。思考：获取某种生物发育的某个时期的所表达的基因？或者是获取某个器官或组织中特异性表达的基因？启动子终止子起始密码子终止密码子本质作用基因组文库cDNA文库基因组文库和cDNA文库的比较：文库类型cDNA文库基因组文库基因结构基因多少基因文库大小物种间基因交流种类外显子部分片段，无内含子，启动子，终止子等小大部分基因可以某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以完整基因，含有内含子，启动子，终止子等一种生物可以有多种一种生物一种思考：如何从基因文库中得到所需要的基因？依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列；基因的功能；基因在染色体上的位置；基因的转录产物mRNA；基因翻译产物蛋白质等特性。注意：基因文库中不是直接保管相应基因，而是保存受体菌，菌中含基因。2、利用PCR技术扩增目的基因（1)概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制___________的核酸合成技术。(3)前提条件：_______________________(2)原理：__________多聚酶链式反应体外特定DNA片段DNA复制已知的目的基因部分核苷酸序列(4)反应体系条件：模板DNA；特异性引物；酶：耐高温DNA聚合酶原料：能量：酶促反应所需离子等四种脱氧核苷三磷酸变性、退火、延伸三步曲变性：加热至90～95℃双链DNA解链成为单链DNA退火：冷却至55～60℃部分引物与模板的单链DNA的特定互补部位相配对和结合延伸：加热至70～75℃以目的基因为模板，合成互补的新DNA链变性退火延伸(5)过程：PCR的基本反应步骤：变性90-95˚C延伸70-75˚C退火55-60˚C2、利用PCR技术扩增目的基因模板DNA95℃PCR的基本原理PCR反应条件PCR过程PCR的...