五味子水溶性多糖提取及纯化工艺的优化VIP免费

五味子水溶性多糖提取及纯化工艺的优化姜波，孙静，刘春，范圣第【摘要】目的研究五味子多糖提取工艺参数及参数的评判方式。方式用水提取醇沉法提取五味子多糖，通过单因素及正交实验，研究固液比、提取温度、提取时刻及提取次数对五味子多糖得率的阻碍，并对多糖得率的质量评判和含量评判方式进行探讨，同时进行了多糖的纯化研究。结果提取温度对五味子多糖得率的阻碍最大，固液比、提取时刻对五味子多糖得率阻碍较小。通过测定提取的多糖含量计算五味子多糖得率与单纯用多糖质量（所得沉淀）计算的五味子多糖得率的比较存在必然的不同，说明采纳含量测定的方式比单纯的质量比所确立的条件更准确。结论五味子多糖提取的最正确工艺条件为：固液比1∶30，提取温度90℃，提取时刻4h，提取3次。用活性炭与Sevage法联合利用纯化多糖，使提取的多糖纯度由%提高到%。【关键词】五味子多糖提取纯化五味子为木兰科植物五味子的果实，因其甘、酸、辛、苦、咸五味俱全，故得名五味子。五味子是名贵中药材，《本草纲目》中记载，五味子益气主治，咳逆上气，劳伤羸瘦，补不足，强阴，养五脏，除热，止呕逆，补虚劳，明目，壮筋骨，除烦热，解酒毒，生津止渴，补元气不足等［1］。临床多用于久咳虚喘、津亏口渴、遗精、自汗、久泻、神经虚弱、肝炎等症［2］。最近几年来通过大量动物和临床实验发觉，五味子还具有保肝、抗衰老、耐缺氧、增强机体免疫力等活性［2，3］。最近几年来研究发觉活性多糖具有抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力、延缓衰老、降血脂、降血糖、解毒、抗辐射等功效［4～8］，其作用日趋受到人们的重视。本文利用对环境无污染的水提取的方式，研究了五味子多糖的提取工艺条件，并进行了粗多糖的纯化及多糖含量的测定。在人们常采纳的通过依据提取多糖质量的多少（所得的多糖沉淀的质量除以样品的质量）来判定提取工艺条件［9～11］的同时，本文又通过测定提取的多糖中的多糖含量（测得的多糖含量乘以提取多糖质量除以五味子的质量）来选择多糖的提取条件，并将两种方式进行了比较。实验结果说明，采纳含量测定的方式比单纯的质量比所确立的最正确条件更靠得住。1仪器与材料仪器与试剂WFJ2100型分光光度计（上海尤尼柯仪器），UV-9200紫外-可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司），微型植物试样粉碎机（天津市泰新特仪器），电子分析天平（上海奥豪斯公司），恒温水浴锅（金北得工贸），TDL80-28台式离心机（上海安亭周密仪器厂），电热恒温干燥箱（上海精宏实验设备）。试剂均为国产分析纯。材料五味子：市购。2方式材料的预处置将五味子在65℃烘箱中烘干后用粉碎机粉碎，过80目筛，于棕色磨口瓶中寄存备用。五味子粗多糖提取方式称取必然量的五味子粉于具塞三角瓶中，按实验的设计加入必然量的蒸馏水，放入水浴中按必然的温度浸提。冷却后，以4000r/min离心20min，所得提取液浓缩至原体积的约1/5，然后加入5倍体积的乙醇，摇匀后，在4℃冰箱中放置24h，以4200r/min离心18min。所得沉淀蒸干乙醇后，在70℃烘箱中烘至干燥，所得固体即为五味子多糖。粗多糖的纯化方式五味子预处置→蒸馏水浸提→离心→浓缩→Sevage法脱蛋白→活性炭脱色→醇沉→离心→干燥→研磨干燥→检测。质量比多糖得率（%）=提取的多糖质量五味子试样质量×100%为了便于区分那个得率以下称为质量比多糖得率。多糖的含量测定方式采纳硫酸-苯酚法，用葡萄糖作为标准测定多糖含量。标准溶液的配制及测定：准确称取000g已干燥的标准葡萄糖，溶解后至100ml容量瓶，用蒸馏水稀释到刻度。用移液管别离取上述配制的葡萄糖标准溶液，，，，ml，转移至100ml容量瓶，并用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。得浓度别离为10，20，30，40，50μg/ml的葡萄糖标准溶液。从上述已配制的葡萄糖标准溶液中别离掏出ml于10ml具塞试管中，再别离加入5％苯酚（W/V）溶液ml，迅速加入浓硫酸ml，摇匀，室温静置15min,30℃水浴中放置15min，在486nm下测其吸光度。样品溶液的配制及测定：准确称取粗多糖，用蒸馏水溶解后，别离转移至50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。用与标样测定相同的方式测定样品中多糖含量。通过标准曲线测得样品浓度后...