土壤微生物分离实验报告周五第二组05级生科基地班刘蕾孙飞卢永峰鲁薪安齐永闪波【摘要】利用分离纯化微生物的基本操作技术对土壤中的微生物进行分离与纯化，根据菌落形态观察、染色鉴定以及一系列的生理生化试验的结果通过查阅《伯杰氏系统细菌学手册》对照种属特征最终判断所分离纯化的细菌所属的属。【abstract】Byseveralmethodsandtechnique,wegotthepureculturesoftwokindsofbacteriawhichwereseparatedfromsoil.Accordingtotheresultsofcolonyobserving,staining,andexperimentsofphysiologyandbio-chemistry,wereferredtotheBergey'sManualofSystematicBacteriologyandfinallydecidedtheirgenus.【关键词】革兰氏阳性、芽孢、片球菌属、芽孢杆菌属【KeyWords】GramPositive、Spore、Pediococcus、Bacillus实验目的：1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理与方法。2、学习、掌握微生物的鉴定方法。3、对提取的土样进行微生物的分离、纯化培养，并进行简单的形态鉴定。4、对简单鉴定后的微生物进行生理生化鉴定并由鉴定结果查伯杰氏手册以确定分离出微生物的品种。实验原理：从复杂的微生物群体中获得只含有一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的方法有1、简单单细胞挑取法2、平板分离法此次实验采取的是平板分离法，该方法操作简单，普遍用于微生物的分离与纯化。其原理包括两方面：1、在适合于待分离微生物的生长条件（如营养、酸碱度、温度与氧等）下培养微生物，或加入某种抑制剂造成只利于待分离微生物的生长，而抑制其他微生物生长的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。2、微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落可以是由一个细胞繁殖而成的集合体。因此可通过挑取单菌落而获得纯培养。获得单菌落的方法可通过稀释涂布平板或平板划线等方法完成。但是从微生物群体中经分离生长在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养。因此，纯培养的确定除观察其菌落的特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定。有的微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到。土壤是微生物生活的大本营，它所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的。因此土壤是微生物多样性的重要场所，是发掘微生物资源的重要基地，可以从中分离纯化的到许多有价值的菌株。此实验将从土壤中分离两种细菌。实验器材、试剂与菌种：1、器材：培养皿、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、烧杯、三角瓶、电炉、玻璃棒、接种环、镊子、搪瓷杯、恒温培养箱、高温灭菌锅、移液枪（枪头）、电子天平、滤纸、pH试纸等。2、试剂：配制牛肉膏蛋白胨培养基的原料（牛肉膏、NaCl、琼脂、蛋白胨）、配置糖发酵培养基的原料（葡萄糖、KHPO、溴百里酚蓝、琼脂、NaCl、蛋白胨）、甘油23（丙三醇）、结晶紫染液、番红染液、碘液、95％乙醇、5％孔雀绿染液、0.5％番红水染液、3％过氧化氢水溶液、1％盐酸二甲基对苯撑二胺溶液、蒸馏水等。3、土样：取自山东大学7号宿舍楼门前土壤，地下10cm左右。实验步骤：1、配制牛肉膏蛋白胨培养基：1、配制牛肉膏蛋白胨琼脂培养基500ml（用于12个平皿和10支试管斜面）牛肉膏0.3%…………………………………1.5g蛋白胨1%……………………………………5gNaCl0.5%…………………………………2.5g琼脂2%……………………………………10gpH…………………………………………7.0~7.22、倒12个平板和10支试管斜面，包扎，121°C灭菌20min.2、制备土壤稀释液：称取土样10g,放入盛有100ml无菌水的带有玻璃珠的三角瓶中，振荡摇匀10min使土和水充分混合，然后用移液枪从三角瓶中吸取1ml（此操作要求无菌操作），加入另一盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此类推分别制成制成0.01、0.001、0.0001不同稀释度的土壤溶液。稀释过程示意图（图中左侧梯形为三角瓶，其中加入100ml无菌水与10g土样，土壤溶液稀释度为0.1依此类推，右侧三试管中土壤稀释度分别为：0.01、0.001、0.0001）3、涂布培养：以0.01以及0.0001两个浓度的土壤稀释液作为涂布平板培养的对象，将其分别涂布在3个牛肉膏蛋白胨培养基中，共6个培养基，标号，37°C温箱...
