,《生理科学进展》2003年04期加入收藏获取最新锁核酸研究进展李生茂徐祥梁华平李磊【摘要】：锁核酸(lockednucleicacid,LNA)是一种新型的寡核酸衍生物,结构中βD呋喃核糖的2’O,4’C位通过缩水作用形成环形的氧亚甲基桥、硫亚甲基桥或胺亚甲基桥,呋喃糖的结构锁定在C3’内型的N构型,形成了刚性的缩合结构。LNA作为一种新的反义核酸,具有与DNA/RNA强大的杂交亲和力、反义活性、抗核酸酶能力、水溶性好及体内无毒性等优点。LNA在基因诊断和基因治疗上有很多优势,如:单链核酸的多态性基因分型、LNA寡聚体具有高效抑制端粒酶活性及LNA修饰的DNA核酶(LNAzymes)高效清除高级结构的RNA等,有良好的应用研究前景【作者单位】：第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室【关键词】：锁核酸核苷酸衍生物寡聚核苷酸【基金】：国家重点基础研究发展规划项目(G1999054203)国家自然科学基金(30170367)全军“十五”课题基金(2001～2005)资助课题【分类号】：R341【正文快照】：反义核酸药物是药学研究的新领域,有希望成为分子水平治疗各种疾病如艾滋病、病毒感染、癌症、炎症反应及心血管疾病、慢性感染性疾病和遗传性疾病等新的突破口,正受到世界范围内的广泛重视。1978年,Zemecnik等首先根据碱基互补配对原则,设计反义寡核苷酸用于基因治疗的《生物化学与生物物理进展》2003年03期加入收藏获取最新锁核酸的特点及其应用李生茂徐祥梁华平李磊【摘要】：【作者单位】：第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室第三军医大学大坪医院野战外科研究所一室【关键词】：锁核酸第三军医大学野战外科亚甲基酸衍生物解的稳定性治疗各种疾病寡核苷酸热稳定性呋喃核糖【分类号】：R341【正文快照】：近期,锁核酸(lockednucleicacid,LNA)作为一种新颖的核苷酸衍生物在药学研究领域引起了人们的广泛关注,有希望成为分子水平治疗各种疾病的新突破口.它是一种特殊的双环状核苷酸衍生物,结构中含有一个或多个2′O,4′C亚甲基βD呋喃核糖核酸单体,核糖的2′O位当前位置:首页>期刊>《中国现代医生》>2010年第11期>正文编号:11899111应用锁核酸探针技术检测肿瘤样本中K-ras基因突变(2)http://www.100md.com2010年4月15日章伟钟翔夏献颗1.2.5测序对SSCP发现有异常片段的DNA随机抽取进行正反双向DNA测序。同时针对LNA探针检测有突变的PCR产物进行克隆后测序确认。2结果2.1LNA探针检测和PCR-SSCP检测及测序结果应用LNA探针荧光PCR方法检测,对照组样本均未发现K-ras基因12密码子突变。85例组织样本中,25例胃癌组织样本检出10例突变(40%),28例直肠癌样本中检出13例突变(46.4%),22例结肠癌样本中检出11例突变(50%),10例胰腺癌样本6例检出突变(60%)。97例肿瘤血浆样本中,30例胃癌血浆样本检出8例有突变(26.7%),32例直肠癌血浆样本检出11例有突变(34.4%),25例结肠癌血浆样本检出12例有突变(48%),10例胰腺癌血浆样本5例检出突变(50%)。随机测序结果表明LNA探针检测突变正确。突变型LNA探针检测结果如图1所示。应用PCR-SSCP方法检测,对照组样本均未发现K-ras基因12密码子突变。85例组织样本中,25例胃癌组织样本检出9例突变(36%),28例直肠癌样本中检出11例突变(39.3%),22例结肠癌样本8例检出突变(36.4%),10例胰腺癌样本5例检出突变(50%)。97例肿瘤血浆样本中,30例胃癌血浆样本检出6例有突变(20%),32例直肠癌血浆样本检出8例有突变(25%),25例结肠癌血浆样本检出11例有突变(44%),10例胰腺癌血浆样本4例检出突变(40%)。随机测序结果表明SSCP方法检测突变正确。PCR-SSCP检测结果如图2所示。2.2LNA探针-荧光PCR法检测敏感性将12密码子突变型K-ras质粒[(102～107)拷贝/L]与一定量的12密码子野生型K-ras质粒按一定比例(1:1、1:10、1:100、1:1000、1:10000)混合,然后进行荧光PCR反应,结果LNA探针检测可以稳定地检出突变型K-ras质粒为10拷贝,检测的灵敏度为1:1000。3讨论近年来,K-ras基因突变的检测被作为肿瘤诊断和治疗预后的一项重要指...
