检定菌种保存、传代、使用、销毁标准操作规程.目的：为规范微生物学检定用菌的管理，确保菌种的溯源性与稳定性，从而确保微生物学检验结果的准确可靠。.范围：本规程适用于检定用菌种的管理，包括菌种的申购、保存、传代、使用及销毁等。、定义：标准菌种是指由中国药品生物制品检定所医学微生物菌种保藏管理中心提供的冷冻干燥菌。传代用菌种是指用标准菌种制备的采用特定保存方法长期固定保存的菌种，用于传代及制备工作用工作用菌种是指用标准菌种或传代用菌种接种至普通琼脂斜面培养后，作为日常工作使用的菌种。菌种的代是指将其接种至一新鲜培养基上或培养基内，每萌发一次即称为一代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌种为第代。.职责：4.1检验科负责提出菌（毒）种的购买申请，并按国家有关生物安全法规的要求做好使用管理和销毁工作。4.2总务科负责实施采购，检验科负责保存、验收。规程：.检定菌的申购检验科每年根据检定菌种的使用情况（包括临时检验需要），提出购买计划，交由中心分管主任审批后，向中检所菌种保藏中心购买冻干菌种（标准菌种）；也可以直接向省（市）疾控部门申请提供传代用菌种，需询问与确定菌种的代数，以便传代时控制代数。.检定菌的接收菌种到达实验室后，由菌（毒）种保管人接收菌种，检查其名称和数量，以及每一支的完整性，同时将菌种的所有信息，填写在《检定菌种接收记录》（附表）上,并将其暂贮存于〜€冰箱中，在一周内必须完成转种。.检定菌的保存•工作用菌种的保存工作用菌种采用斜面低温保存法。将菌种接种在适宜的固体斜面培养基上，待菌生长充分以后，转移至〜°C冰箱中保存。此法仅用于工作用菌种的短期保存，并应随时检查其污染杂菌和变异等情况，发现异常情况，经应灭活处理后销毁。保存时间根据菌种种类而不同，细菌：个月；酵母菌：个月；霉菌及芽胞：个月。•传代用菌种的保存采用甘油冷冻管保藏法或液体石蜡保存法。.甘油冷冻管保存法用无菌接种环轻轻刮取经冷冻复溶增菌后并接种至平板或琼脂斜面的菌苔，并通过接种环与试管壁之间的轻轻摩擦而使细菌充分扩散到预先装入试管中的无菌纯化水中，调整菌液浓度，使其等同于号比浊管，向已制备好的菌悬液中加入等体积的无菌甘油（浓度），即为甘油菌悬液，轻轻振摇，使内容物充分混合，分装于无菌小试管，在°C冷冻条件下保存。此甘油冷冻管为第代（）。可以每隔年转种一代。使用时，取出一支放至室温，转种增菌培养或接种至琼脂斜面复苏，挑取纯菌落传代或工作用。此种方法主要适用于需氧细菌和酵母菌的保藏（如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、乙型副伤寒沙门菌）。•液体石蜡保存法.无菌液体石蜡的制备：选用优质化学纯液体石蜡，将液体石蜡分装加塞，用牛皮纸包好，在C灭菌分钟置°C恒温箱中蒸发水分，经无菌检查后备用。•液体石蜡管的制备：将菌种穿刺接种于半固体高层培养基中，在适宜条件下培养结束后，在层流台下用无菌吸管吸取上述无菌液体石蜡至培养好的菌种管内，并使石蜡高出菌种表面约使菌体与空气隔绝，并将试管直立，置于C冷冻或〜C冰箱中保存。此法主要适用于霉菌、厌氧菌、放线菌、芽孢杆菌的保存（如枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉菌等）。.各菌种的保存方法、条件及期限，见《传代用菌种保存方法、保存温度、保存期限》（附件）。.检定菌的传代检定菌菌种的传代因冻干菌（标准菌种）与传代用菌种而不完全相同。.标准菌种的复苏、确认、传代.标准菌种的复苏.把冻干菌种管、灭菌毛细滴管（）、双碟、镊子、营养肉汤培养基（或其它适宜培养基）数支，移入接种室或超净工作台。.将冻干菌种管外壁用碘酒擦洗消毒，稍干，用乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将标准菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，用灭菌毛细滴管吸取营养肉汤培养基（或其它适宜的培养基），滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。•取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取支灭菌毛细滴管，在火焰旁吸取营养肉汤培养基（或其它适宜的培养基）少许，加至菌种管底部，将冻干菌块搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，接种至营养肉汤培养基（或其它适宜的...
