第�卷第�期温和瑞等�荧光指示剂在细胞内金属离子侧定中的应用化学试剂,����,�����,������荧光指示剂在细胞内金属离子测定中的应用”温和瑞黄振泉��翰南师范学院化学系,翰州��。。��摘耍概述了荧光指示剂测定细胞内金属离子的原理、仪器及进展。简要介绍了���。一����、���一���。一����、����和���分别用于细胞内����、��,�、���和��的测定。关傲词荧光指示剂,金属离子,细胞,应用生物体中的许多生理活动都包含着金属离子的作用。例如,��,十对细胞的代谢与功能有着重要的调节作用【’,”。��,十是一种细胞内部结构稳定剂和内酶的辅因子,它对���的复制和蛋白质的生命合成必不可少〔”‘飞��十的主要生理功能是维持细胞正常的渗透压和膜电位。�十作为细胞内酶的辅基,细胞内外�十和���的浓度梯度是膜电位的主要来源。因此,研究细胞内��,�、��,�、���和��等离子浓度的变化,在生命科学中具有重要的意义。应用荧光指示剂测定细胞内金属离子是八十年代发展起来的一门新技术,�它具有高敏感、响应快、对细胞无损伤和测定简便等优点,因而具有广泛的应用前景。�荧光指示剂的发展最早用于细胞内金属离子测定的荧光剂是氯四环素,��������〔�,用它来测定细胞内的�。’十。但氯四环素在非极性溶剂中荧光强度很强,而在极性溶剂水中却很弱,这一缺点影响�它用于细胞内��’�的侧定。���年�����「,’合成出一种类似于���结构的钙荧光指示剂�,�一双�邻氨基苯氧基�乙基一�,�’一四乙酸。这种荧光剂的醋可以渗透到细胞中,但它的离子选择性较差。���年,�����〔”等进一步对该化合物进行结构改进合成出能适用于细胞内��’十侧定的第一代荧光指示剂����一�。但����一�仍然存在一些不足,如����一�对��’�的选择性仍较差,激发光波长受到细胞自发荧光的千·扰等。����年,�����������「,,等发展了目前使用最为广泛的第二代��’干荧光指示剂����一�。����一�比����一�产生的荧光强���倍,对����有较好的选择性。现在已经合成出了第三代钙离子荧光指示剂�一��一�〔,,。����一�结合��’�后荧光强度比游离态����一�强�倍以上,而且最大吸收激发光波长位于����,能远离���������的激发光范围,避免了透镜的吸收和细胞自发荧光的干扰。����年,������「’。,等合成出一类以冠醚为分子骨架的�。�和�十的荧光指示剂。其中性能较好的是��十一����和���。����〔”】等合成出��,小荧光指示剂���一���。一�。图�为几种荧光指示剂的分子结构。�侧定原理��,�、��,�、���和��等金属离子,它本身在可见光范围内没有荧光,但当它与荧光指示剂结合后,能使荧光指示剂的荧光光谱发生变化。下面我们以���。一�侧定细胞内�。’十为例来说明其测定原理。用于细胞内余属离子甜定的荧光指示剂均有两种形式�游离酸形式和其醋的形式����。游离酸能与金属离子收稿日期����年�月��日。”本文部分内容,在《全国微�元素与健康学术交流会》上交流。江西省青年科学甚金资助课月。����年���’�,���一��入��’�一�喊、‘,一�二毛》���分、�’‘�〔’·冲�、��氯四环东�,�一议�邻氨从苯俄从�乙华一���夕一四乙队���‘��卜自袱��之一劝��。������峭���������丁。文““丫、“一”全“、,‘�‘‘’‘广’之又犷’“,,‘一�求丫勺叮丫一丫淤��一���卜����全,’����‘,�尹�‘�“”���。一”诊入���一�,��是卜��。、乡全址入一飞方。���”�又��初二丫��守��灯�‘火�知�����‘���������图�几种荧光指示剂的分子结构结合,但不能渗入细胞。��不能与金属离子结合,但能渗人细胞。����一����进人细胞后,在胞浆醋酶的作用下,水解脱醋释放出����一�。����一�与胞内��’十结合形成�����一��。����一�一��较���...
