定量与常规PCR的差别VIP免费

东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn定量与常规定量与常规PCRPCR的差的差别别OpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之常规PCR技术：对PCR扩增反应的终产物进行定量及定性分析定量PCR技术：通过对PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析三个关键词：实时，定量，荧光东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cnOpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之如何定量？如何定量？CtCt值的概念值的概念•Ct值的定义是PCR扩增过程中，荧光信号开始由本底进入指数增长阶段的阈值所对应的循环次数。为什么要用为什么要用CtCt值定量值定量•实时荧光定量PCR方法利用循环阈值（Ct）的概念，在指数扩增的开始阶段进行检测，此时样品间的细小误差尚未放大，因此该Ct值具有极好的重复性。东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn定量原理定量原理初始DNA量越多,荧光达到某一值（域值）时所需要的循环数越少Log浓度与循环数呈线性关系，根据样品扩增达到域值的循环数就可计算出样品中所含的模板量确定初始模板的浓度OpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cnSYBRGreen1SYBRGreen1MolecularMolecularBeaconsBeaconsTaqManTaqMan荧光化学荧光化学OpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cnAmplifluorAmplifluorRocheRoche荧光化学荧光化学OpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之阴阳探针阴阳探针R1R2RQ东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cnSYBRGreenISYBRGreenI工作原理工作原理OpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之SYBRGreen1结合到双链DNA的小沟部位SYBRGreen1染料只有和双链DNA结合后才发荧光。GTTTGGCCCCCCCAAAGGGACTTGATAGCATCGTAA东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cnGTTTTTTGGGGCCCCCCCCAAAAATACCGGGGTTACGAACGGTAAT变性DNA未结合SYBRGreen1dye变变性性::无无荧光信号荧光信号SYBRGreenISYBRGreenI工作原理工作原理OpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cnSYBRGreenISYBRGreenI应用范围应用范围起始模板浓度定量融解曲线分析---可区分单一产物、变异产物、多种产物和（或）引物二聚体基因型分析OpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cnSYBRGreenISYBRGreenI优点优点使用方便---不必设计复杂的引物没有序列特异性---可以用于不同的模板便宜灵敏OpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cnSYBRGreenISYBRGreenI缺缺点点与非特异性产物结合OpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cnMolecularMolecularBeaconsBeaconsMolecularBeaconsMolecularBeaconsOpticonOpticon实时荧光定量实时荧光定量PCRPCR仪之仪之发夹型杂交探针东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn东胜创新东胜创新www.eastwin.com.cnwww.eastwin.com.cn...