动物细胞培养动物细胞融合生产单克隆抗体动物细胞核移植动物细胞工程常用技术其它动物细胞工程的基础学习目标动物细胞培养定义、过程、条件、应用动物体细胞核移植技术定义、过程、应用、存在问题一、动物细胞培养1.概念：细胞增殖动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。2.原理：3.过程取出组织胚胎或幼龄动物的器官组织剪碎组织胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理单个细胞制成细胞悬液转入培养瓶内（培养液）置于适宜环境中培养加培养液稀释动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官胰蛋白酶处理取出组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎单个细胞细胞悬液细胞贴壁接触抑制转入培养瓶内（培养液）置于适宜环境中培养思考：转入培养瓶内培养会发生哪些现象？■细胞贴壁：悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。■培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于帖附。细胞进行有丝分裂，数量不断增多。接触抑制■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。取出组织胚胎或幼龄动物的器官组织剪碎组织胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理单个细胞制成细胞悬液加培养液转入培养瓶内培养（细胞贴壁；接触抑制）原代培养定义：人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养动物组织块细胞悬液细胞悬液原代培养（细胞贴壁；接触抑制）传代培养胰蛋白酶处理分散成单个细胞幼龄动物的器官组织；动物胚胎加入培养液用胰蛋白酶等处理贴壁细胞；分瓶继续培养。适宜条件当原代培养的细胞处于接触抑制后，用胰蛋白酶处理，使细胞从瓶壁上脱离下来，然后加入新的培养液，将细胞分离稀释，并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内，这个过程称传代培养（分瓶培养的过程）。传代培养10代细胞50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系遗传物质已改变遗传物质未改变动物胚胎或幼龄动物的组织、器官配置细胞悬液胰蛋白酶处理转入培养瓶单个细胞加培养液稀释分瓶原代培养原代培养特点：细胞贴壁、接触抑制动物胚胎或幼龄动物的组织、器官配置细胞悬液胰蛋白酶处理10代细胞转入培养瓶40-50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液稀释传代10代以内，遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。分瓶继续传代培养少部分细胞获得不死性，细胞突变，遗传物质已经改变，等同于癌细胞。细胞株：一般说遗传物质未改变细胞系：遗传物质已改变原代培养动物细胞培养的原理：细胞增殖为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？因为其细胞生命力旺盛，分裂能力强，分化程度低。为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？扩大细胞与培养液的接触面积，利与细胞吸收营养。10代以内的细胞遗传物质不改变，保持正常二倍体核型。目前使用的或冷冻保存的正常细胞通常在10代以内，为什么？动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？不能，动物细胞培养只能使细胞数目增多，不能发育成新的动物个体。4.动物细胞培养的条件1）无菌、无毒的环境：适宜的温度：人和哺乳动物细胞最适温度为36.5±0.5℃适宜的酸碱度：PH：7.2-7.4液体合成培养基：（葡萄糖、氨基酸）、促生长因子、（水、无机盐、微量元素）等；通常还需加血浆、血清等天然成分。4）气体环境：2）营养：3）温度和pH：“95％空气+5％CO2”的混合气体培养箱。氧气是细胞代谢必须的；CO2维持培养液的pH。对培养液和所有培养用具无菌处理；培养液中添加抗生素防止培养过程中污染；定期更换培养液以清除代谢产物，防止对培养细胞造成危害。动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？主要成分：葡萄糖、氨基酸、水、无机盐、维生素和动物血清等。独特之处有：1.液体培养基2.成分中有动物血清等加入动物血清原因：提供一个类似生物体内的环境；含营养物质（如生长因子）促进细胞发育。用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间物质主要成分是什么？用胃蛋白酶行吗？在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜...
