第六章蛋白质和DNA技术第六章蛋白质和DNA技术第六章蛋白质和DNA技术第1节蛋白质的提取和分离第六章蛋白质和DNA技术学习导航1.知道蛋白质分离和提取技术的基本原理。2.尝试蛋白质的提取和分离。[重、难点]第六章蛋白质和DNA技术新知初探思维启动一、蛋白质分离提纯技术1.将生物体内的蛋白质提取出来并加以分离，就可以得到高纯度的、甚至是___________的蛋白质。2.包括离心技术、层析技术和电泳技术等。其中，______技术最为快捷灵敏、简便易行。单一种类电泳第六章蛋白质和DNA技术二、电泳技术及分离蛋白质的原理1.电泳现象：作为带电粒子，蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷______的电极方向移动。2.电泳技术分离蛋白质的原理(1)蛋白质含有游离的氨基和羧基，是______电解质，在一定pH条件下带有电荷。相反两性第六章蛋白质和DNA技术(2)蛋白质在电场中可以向与其自身所带电荷______的电极方向移动。(3)蛋白质所带的电荷数越多，移动得_____；电荷数相同时，分子量_____，则移动越快。三、“血清蛋白的提取和分离”活动程序1.点样：将新制血清5μL、质量浓度为0.4g/mL的________和质量分数为0.1%的______指示剂等体积混匀后，用微量加样器吸取5μL样品，小心加到电泳样品槽的胶面上。相反越快越小蔗糖溶液溴酚蓝第六章蛋白质和DNA技术2.电泳3.染色：用质量分数为0.05%的_______________染色液对凝胶进行染色。4.脱色：用体积分数为7%的__________对凝胶板进行浸泡漂洗数次，直至底色脱净。5.制干胶板：将已_____的凝胶板放在______中浸泡3h～4h后，放在两层透气的_______中间自然干燥。考马斯亮蓝R250醋酸溶液脱色保存液玻璃纸第六章蛋白质和DNA技术判一判(1)蛋白质和DNA都可以用电泳的方法进行分离纯化。(√)(2)在同一个电场电泳后，在凝胶中形成的一个带纹就是一种单纯蛋白质。(×)(3)在电泳时，应先将稳压稳流电泳仪调到20～30mA，再使样品进入分离胶。(×)(4)分离操作正确的前提下，如果带纹均匀、狭窄、平整，则说明分离效果比较好。(√)第六章蛋白质和DNA技术四、其他蛋白质的提取与分离1.牛奶中酪蛋白的提取与检测(1)当pH＝___时，酪蛋白的溶解度降低，并析出沉淀。用______除去酪蛋白沉淀中的_____后，即得到纯的酪蛋白。(2)酪蛋白中含有酪氨酸，能与______试剂起颜色反应，首先生成白色沉淀，加热后变成红色。4.8酒精脂肪米伦第六章蛋白质和DNA技术2.卵清蛋白质的分离选取鸡、鸭、鹅、鹌鹑等动物的新鲜_____做实验材料。采用______法分离卵清蛋白质。卵清电泳第六章蛋白质和DNA技术想一想可否利用蛋白质的提取与分离技术快速诊断早期癌变？【提示】可以。只需从早期患者的尿液、血液或细胞裂解液中提取少量蛋白质样品,采用蛋白质指纹图谱技术，就可以更加快速、简便、准确地对细胞癌变作出诊断。第六章蛋白质和DNA技术要点突破讲练互动要点一电泳的常用方法1.琼脂糖凝胶电泳：由于琼脂糖本身不带电荷，所以，各种分子在电场中的迁移速率因各种分子的带电性质差异、分子大小、形状不同而不同，从而得以分离。第六章蛋白质和DNA技术2.聚丙烯酰胺凝胶电泳(1)凝胶形成：第六章蛋白质和DNA技术(2)加入SDS作用：使蛋白质发生完全变性，解聚成单条肽链；与各种蛋白质形成蛋白质－SDS复合物，SDS所带负电荷的量远远超过了蛋白质分子原有电荷量，掩盖了不同蛋白质间的电荷差别，使电泳迁移率完全取决于分子的大小。第六章蛋白质和DNA技术3.结果分析(1)不同蛋白质的混合溶液，在经过同一个电场电泳后，会在凝胶上形成不同的带纹，每一种带纹可能就是一种蛋白质。(2)如果要对每一条带纹作进一步的研究，只需将带纹剪下，分别予以洗脱，然后对洗脱液中的蛋白质做进一步分离。第六章蛋白质和DNA技术特别提醒①琼脂糖凝胶电泳操作简单，电泳速度快，样品不需事先处理。②琼脂糖凝胶电泳后区带易染色，样品极易洗脱，便于定量测定。③测定蛋白质相对分子质量通常用SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，原因是在一定浓度范围内聚丙烯酰胺的热稳定性强，可用检测仪直接测定。第六章蛋白质和DNA技术关于电泳的说法不正确的是()A．电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程B．带电分子会向着与...
