血清LDH同工酶测定及图谱分析南昌大学医学院关于同工酶1957年Markert等人用电泳的方法将纯化的心肌乳酸脱氢酶(LDH)分离出5条区带，由阳极到阴极依次命名为LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5，它们均具有LDH催化活性，从而首先在1959年提出了同工酶的概念。南昌大学医学院同工酶:来源于同一个体或组织，能催化相同的化学反应，但其蛋白质分子结构、理化性质和免疫性能等方面都存在明显差异的一组酶。最典型的同工酶是乳酸脱氢酶（LDH）同工酶。南昌大学医学院为什么要进行血清LDH同工酶测定？南昌大学医学院南昌大学医学院生物学中的应用：可用于研究物种进化、遗传变异、杂交育种和个体发育、组织分化等。例如最原始的脊椎动物七鳃鳗只有一种LDH肽链，进化到较高级的鱼类才有A、B两类肽链；LDH同工酶广泛存在于动植物及微生物中，动物各组织中LDH同工酶各组分含量不同，具有明显的物种间差异可作为动物分类的生化依据。同工酶的应用文献：科四种鱼鲿LDH同工酶谱的研究【摘要】：采用聚丙烯酰胺凝胶电泳方法对科四种鲿鱼血清中LDH同工酶进行电泳分析,结果表明:四种鱼血清LDH同工酶图谱的区带分布具有种的特异性;四种鱼血清LDH同工酶A、B亚基比例关系反映的各品种间亲缘的关系与形态学特征分析结果吻合,为科四鲿种鱼分类提供进一步的理论依据.南昌大学医学院同工酶的应用是否人种间在差异呢？这个答案不得而知，但有一点是明确的，那就是LDH同工酶在人体不同器官和组织间是有差异的，从医学角度来讲，利用这种特异性临床上对LDH同工酶的检测可作为某些疾病诊断的依据之一。南昌大学医学院同工酶的应用南昌大学医学院在临床检验方面，通过观测病人血清中LDH同工酶的电泳图谱，辅助诊断哪些器官组织发生病变，远较单纯测定血清LDH总活性的方法敏感。例如，心肌受损病人血清LDH1含量上升，肝细胞受损者血清LDH5含量增高。同工酶的应用一、LD同工酶的形式南昌大学医学院H（heart）、M（muscle）南昌大学医学院二、LD同工酶的分布南昌大学医学院组织中的比例不同，心肌中以LDH1及LDH2较为丰富，骨骼肌及肝中含LDH5及LDH4较多。这都与它们的生理功能关。LDH1和LDH2对乳酸亲和力高，易使乳酸脱氢氧化生成丙酮酸，后者进一步氧化可释放出能量供心肌活动的需要；LDH5与LDH4对丙酮酸的亲和力高，而使它得氢还原成乳酸，这对保证肌肉在短暂缺氧时仍可获得能量有关。乳酸脱氢酶同工酶---琼脂糖：直链多糖，半乳糖和3,6-脱水-L-半乳糖的残基交替排列组成，主要通过氢键形成凝胶。凝胶电泳其优点如下：①操作简单，电泳速度快②凝胶结构均匀，含水量大，对蛋白质吸附极少，电泳图谱清晰，分辨率高，重复性好。③电泳区带易染色，可透明直接扫描、可长期保存等优点。南昌大学医学院琼脂糖凝胶电泳1、琼脂糖凝胶电泳法原理根据LD同工酶一级结构和等电点的差异，在一定电泳条件下，使LD在支持物上被分离。利用酶促反应进行显色，显色深浅与酶活性成正比，利用光密度扫描仪可求出各同工酶的相对含量南昌大学医学院柱层析法免疫化学法热稳定性和抑制法*电泳法：醋酸纤维薄膜聚丙烯酰胺凝胶琼脂糖凝胶三、测定方法南昌大学医学院LDH在电泳中的分离因素电荷因素蛋白质分子形状和大小相同，所带电荷性质和数量不同分子大小蛋白质分子形状和所带电荷性质和数量相同，分子大小不同分子形状蛋白质分子所带电荷性质和数量相同，分子形状不同电荷因素分子大小分子形状南昌大学医学院以乳酸钠为底物,LDH催化乳酸脱氢生成丙酮酸,同时使氧化型辅酶INAD+还原为NADH,NADH又将氢传递给吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS),PMS再将氢传递给氯化硝基四氮唑蓝(NBT),使其还原为紫蓝色化合物,因此有LDH活性的区带即着紫蓝色且颜色深浅与LDH活性成正比.1、LDH同工酶琼脂糖凝胶电泳显色原理南昌大学医学院缓冲液条：内含pH8.4、离子强度0.075的巴比妥缓冲液缓冲琼脂糖凝胶板：内含0.08mol/L，pH8.3巴比妥-盐酸缓冲液EDTA-Na2溶液（10mmol/L），5g/L琼脂糖底物显色液（临用前配制）固定漂洗液2、试剂南昌大学医学院打开仪器，选择电泳程序点样、保湿，放电极架、挂缓冲条、放凝胶板放点样梳、电泳，配显色液加显色...
