聚丙烯酰胺凝胶电泳VIP免费

聚丙烯酰胺凝胶电泳PolyacrylamideGelElectrophoresis，PAGELiLi一、一、PAGPAG的组成的组成PAGPAG是由是由丙烯酰胺丙烯酰胺（（acrylamideacrylamide，，AcrAcr））单体和单体和NN，，N’-N’-亚甲亚甲双丙烯酰胺双丙烯酰胺（（NN，，NN，，N’N’，，N’-methyleneN’-methylenebixacrylamidebixacrylamide，，BisBis））交联剂通过自由基聚交联剂通过自由基聚合而成的一种多孔三维网状结构。合而成的一种多孔三维网状结构。Acr+Bis-----Acr+Bis-----多孔三维网状结构多孔三维网状结构（1）丙烯酰胺结构式（（22）亚甲双丙烯酰胺）亚甲双丙烯酰胺二、二、PAGPAG的聚合的聚合需要催化剂——氧化还原系统作用，使需要催化剂——氧化还原系统作用，使AcrAcr单体带有游离基，从而与单体带有游离基，从而与BisBis进行聚合。进行聚合。（一）化学聚合：（一）化学聚合：AP-TEMEDAP-TEMED系统系统过硫酸胺过硫酸胺[([(NHNH44))22SS22OO88]]（（AmmoniumAmmoniumpersulfatepersulfate，，APAP））作为催化剂，四甲基乙二作为催化剂，四甲基乙二胺胺（（TEMEDTEMED））为加速剂。为加速剂。APAP在水溶液中能产生游离基在水溶液中能产生游离基SOSO442-2-，，使丙烯酰使丙烯酰胺单体的双键打开，活化形成自由基丙烯胺单体的双键打开，活化形成自由基丙烯酰胺，然后游离酰胺，然后游离AcrAcr和和BisBis作用就能聚合作用就能聚合形成凝胶。形成凝胶。TEMEDTEMED的游离碱基能促进的游离碱基能促进APAP的形成的形成SOSO442-2-。。注意：注意：TEMEDTEMED量多少都会影响催化作用，须在碱量多少都会影响催化作用，须在碱性条件下聚合性条件下聚合分子氧存在，聚合不完全，须去除分子分子氧存在，聚合不完全，须去除分子氧，隔绝氧氧，隔绝氧升高温度能提高聚合，降低温度能延迟升高温度能提高聚合，降低温度能延迟聚合聚合（二）光聚合：核黄素（二）光聚合：核黄素--TEMEDTEMED系统系统核黄素核黄素（（riboflavinriboflavin））在光照下（可见光或在光照下（可见光或紫外光）分解，其黄素部分被还原成无色型，紫外光）分解，其黄素部分被还原成无色型，但在有氧条件下无色型又被氧化成带有游离但在有氧条件下无色型又被氧化成带有游离基的黄素，其也能使基的黄素，其也能使AcrAcr和和BisBis聚合形成凝聚合形成凝胶。胶。注意：注意：分离胶的合成一般采用化学聚合。因为若用分离胶的合成一般采用化学聚合。因为若用光聚合，凝胶的孔径受光照强度与时间的影光聚合，凝胶的孔径受光照强度与时间的影响，导致孔径大小不同，从而影响蛋白质的响，导致孔径大小不同，从而影响蛋白质的分离。分离。三、三、PAGPAG的浓度与孔径的关系的浓度与孔径的关系PAGPAG孔径的大小主要由孔径的大小主要由AcrAcr和和BisBis这两种这两种单体的浓度决定。可以根据要分离物质分子单体的浓度决定。可以根据要分离物质分子的大小，选择合适的单体浓度。的大小，选择合适的单体浓度。Acr/BisAcr/Bis：：20~4020~40完全透明且有弹性；完全透明且有弹性；＜＜1010很脆，易碎，不透明；很脆，易碎，不透明；＞＞100100糊状不成形，易破碎。糊状不成形，易破碎。凝胶总浓度凝胶总浓度T——100mlT——100ml凝胶溶液中含有凝胶溶液中含有AcrAcr和和BisBis的总克数。的总克数。T=T=（（a+ba+b））/m×100%/m×100%TT越大，凝胶孔径越小，适用于分离分子量越大，凝胶孔径越小，适用于分离分子量较小的物质。较小的物质。TT越小，凝胶孔径越大，适用于分离分子量越小，凝胶孔径越大，适用于分离分子量较大的物质。较大的物质。C——BisC——Bis占单体与交联剂总量的百分比。占单体与交联剂总量的百分比。C=b/C=b/（（a+ba+b））×100%×100%当当TT固定时，固定时，BisBis浓度在浓度在5%5%时孔径最小。时孔径最小。四、不连续四、不连续PAGEPAGE按具体操作分垂直板形电泳按具体操作分垂直板形电泳圆盘电泳圆盘电泳按凝胶系统的均匀性分连续按凝胶系统的均匀性分连续PAGEPAGE不连续不连续PAGEPAGEDisc-PAGEDisc-PAGE成分成分作用作用样样品品胶胶T=3%C=20%T=3%C=20%单体单体欲分离的样品溶液欲分离的样品...