细菌的分布与分离接种VIP免费

医学微生物学实验微生物学教研室2011年4月实验内容一、细菌分布实验空气中细菌的检查（操作）皮肤、日常物品细菌的检查（操作）二、细菌分离接种技术（操作）平板划线接种法；斜面培养基接种法液体培养基接种法；半固体穿刺接种法三、细菌在培养基上生长现象（示教）目的要求认识细菌在外界的分布规律掌握细菌分离培养基本技术认识细菌在不同培养基中的生长现象一、细菌的分布实验（1）空气细菌检查材料：培养基，普通琼脂平皿（2）皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查材料：培养基，无菌生理盐水，75%酒精棉球，2.5%碘酒棉球，无菌棉棒（3）自来水中的细菌检查材料：培养基，无菌棉棒，酒精灯1.空气中细菌的检查(操作,4块/室)取三块琼脂平板，将2个打开皿盖分别置于不同的环境15~30min后，盖好皿盖。另外1个不启盖作为对照。置37℃培养18~24h。材料：普通琼脂平板方法：结果：计数菌落数，观察菌落数的差异。2、皮肤（其他物品）消毒前后的细菌检查方法在1个平皿底部做好标记，分为消毒前与消毒后两个区域。取一支无菌棉签放入无菌盐水中浸泡，在管壁上挤干水后擦拭皮肤或其他物品，然后将该棉签涂布于无菌平皿消毒前区域，作来回划线，注意勿划破琼脂表面。将皮肤区域或物品用碘酒棉球及酒精棉球涂擦消毒，另取一支无菌棉棒用消毒前所述方法取材，接种于标有消毒后的平皿区域。平皿37℃、24h培养后取出观察表面有无细菌生长，比较消毒前后菌落数目，描述菌落特征。结果：计数菌落数37×18~24h℃消毒前消毒后自来水中的细菌检查在1个平皿底部做好标记。用酒精灯对水管口灭菌，拧开水管开关放水15S。取一支无菌棉签蘸取自来水，将该棉签涂布于标有消毒前的无菌琼脂平皿表面，作来回划线，注意勿划破琼脂表面。将平皿于37℃、24h培养后取出观察平皿表面有无细菌生长，描述菌落特征。1.半固體培養基接種法（操作）2.斜面培養基接種法3.液體培養基接種法細菌的接種法（一）分離培養1.平板分離劃線接種法（操作）（二）純培養接种环（上）和接种针（下）柄约22cm2—5mm绝缘柄约7.5cm金属柄约14.5cm5—8cm安装环(针)的螺口(约8mm)无菌操作无菌操作Asepticarea10-20cm外外外外外外菌液采取法（一）平板划线接种法（分离培养法）①连续划线法②分段划线法IVIII1/5I1/10Rotate90FlameloopRotate90Rotate90III1/4Flameloop（一）平板划线接种法（分离培养法）培养结果132注意事项：1.①②③区之间接种要灭菌2.用力适当，不要划破琼脂表面3.注意无菌操作（二）液体培养基接种法（二）液体培养基接种法（三）半固体穿刺接种法用途：观察细菌动力，保存菌种。斜面培养基接种法（操作）用途：常用于扩大纯种细菌及实验室保存菌种。斜面培养基接种法液体培养基接种法半固体培养基接种法（操作）方法：穿刺接种结果：沿穿刺线生长——动力-扩散生长——动力+三、细菌在培养基上生长现象（示教）沉淀—成链生长浑浊—均匀分散生长菌膜—表面生长（需氧菌）1.固体2.半固体3.液体菌落菌苔动力+动力-固体培养基生长现象液体培养基中生长现象沉淀生长沉淀生长混浊生长混浊生长表面生长表面生长半固体培养基中生长现象有鞭毛动力+无鞭毛动力－沿刺线生长混浊生长培养基生长现象用途固体平板固体斜面液体半固体细菌在培养基上生长现象实验报告记录细菌分布实验实验结果记录细菌在各种培养基上的生长现象