细胞工程7胚胎干细胞培养VIP免费

CELLENGINEERING细胞工程第一章绪论4个学时第二章实验室配置及基本技术2个学时第三章植物细胞工程的理论基础4个学时第四章植物组织器官培养技术6个学时第五章植物细胞培养及次生代谢产物生产3个学时第六章原生质体培养和体细胞杂交3个学时第七章人工种子及植物种质资源保存2个学时第八章胚胎干细胞培养2个学时第九章动物细胞培养4个学时第十章动物细胞融合与单克隆抗体4个学时第十一章动物组织与胚胎工程1个学时第十二章试管动物与克隆动物1个学时课程初步安排：36学时第七章胚胎干细胞培养干细胞是什么ES/EG细胞的培养及建系技术ES/EG细胞的体外诱导分化诱导分化细胞的永生化ES/EG细胞技术学在医学中的应用ES/EG细胞技术学面临的问题和研究趋势一、干细胞（stemcells）是什么•具有无限的或延长的自我更新能力的细胞•能产生至少一种类型的高度分化的细胞从具有的分化潜能上讲：--专能干细胞--多能干细胞--全能干细胞从组织发生即来源上讲：--胚胎性干细胞--成体干细胞/组织干细胞胚胎性干细胞是一类来自早期胚胎、原始生殖细胞等源于胚胎的干细胞，基本特征是有稳定地在体外自我更新、稳定地维持正常核型和发育全能或多能性、能够分化为属于三胚层范畴的各种类型分化细胞，甚至参与个体发育。--来自早期胚胎：胚胎干细胞（embryonicstemcells,ES）--来自胚胎生殖嵴中的原始生殖细胞：胚胎生殖细胞（embryonicgermcells,EG）--来自畸胎瘤组织：胚胎性癌细胞（embryonalcarcinomacells,EC）－－1981年，Evens和Martin分别成功的分离和体外培养了小鼠的胚胎干细胞；－－1995年，Thomson等人分离建立了第一株灵长类动物的胚胎干细胞；－－1998年，Thomson等建立了第一株人类胚胎干细胞；－－1998年，Shamblott等建立了第一株人类生殖干细胞；－－2002年3月，美国麻省理工学院科学家宣布，他们首次利用人体胚胎干细胞培育出毛细血管，证明了胚胎干细胞技术在治疗心血管疾病等领域的应用潜力；－－目前已有报导，ES细胞在离体适当条件下分化为心肌细胞，胰岛细胞及血管内皮细胞，肝细胞等。成体干细胞（adultstemcells,AS），也叫作组织干细胞（tissuestemcells）是指一群分布在成体组织中处于尚未分化的、具有自我更新并负有构建和补充某种组织的各种类型细胞潜能的干细胞。如骨髓的造血干细胞、间充质干细胞；神经系统的神经干细胞；肝干细胞；骨骼肌干细胞等。--造血干细胞可分化为血液系统的各种细胞；小肠和皮肤中的干细胞具有分化、补充和更新小肠和皮肤组织的能力。--骨髓干细胞除了形成各种血细胞和衍生于间质细胞的各类细胞外，还可被诱导分化为神经细胞、肌肉细胞、骨和肝细胞等不同分化细胞。二、ES/EG细胞的培养建系技术分离囊胚的内细胞群与成纤维细胞共培养，ES细胞非分化增殖分离胚胎生殖腺细胞胚胎干细胞的鉴定定向诱导分化功能细胞1、ES/EG细胞的来源(1)发育良好的囊胚，从中分离ICM，进一步分离培养ES细胞(2)从胚胎生殖腺中分离出EG细胞(3)从畸胎瘤中分离出EC细胞(4)治疗性克隆即体细胞核转移（SCNT）途径分离培养ES细胞2、ES/EG细胞的分化抑制培养目前常用的细胞分化抑制物主要有三种:--饲养层细胞(feederlayer)--特殊细胞的条件培养液(conditionedmedium),如BRL(Buffaloratliver)细胞条件培养液--分化抑制因子(differentiationinhibitoryfactor,DIF),如白血病抑制因子(leukemiainhitoryfactor,LIF)饲养层细胞培养法：常用的饲养层细胞有下列两种：（1）MEF细胞(mouseembryonicfibroblast)，取自各种品系小鼠的12dpc胚胎。经剪碎和胰蛋白酶消化，常规分散细胞培养为单层散布的成纤维细胞。（2）STO细胞，来自SIM小鼠(S)胚胎的对硫代鸟嘌呤(T)和乌本苷(O)有抗性的成纤维细胞系，能分泌干细胞生长因子(stemcellfactor,SCF)以及白血病抑制因子(leukemiainhibitoryfactor,LIF)。无饲养层培养法：饲养层细胞的制备在一定程度上使ES/EG细胞培养显得较繁杂。近来以添加LIF生长因子或某些特定细胞的条件培养液至含FCS的正常培养液，借此替代饲养层细胞：（1）直接在ES细胞基础培养液中加入重组LIF（2）Buffalo大鼠肝细胞条件培养液(BRL-CM)（3）2...