细胞培养操作规范一：细胞培养的基本条件：一：细胞培养的基本条件：1.1.无菌环境：无菌环境：细胞培养间消毒细胞培养间消毒aa：使用前紫外照射：使用前紫外照射20-3020-30分钟分钟bb：使用完：使用完75%75%酒精擦拭台面，紫外照射酒精擦拭台面，紫外照射1515分钟。分钟。cc：每两周用：每两周用8484消毒液擦拭地面、台面一次消毒液擦拭地面、台面一次的方式进行消毒的方式进行消毒超净工作台：超净工作台：使用前使用前开启柜内紫外灯照射开启柜内紫外灯照射1515－－3030分钟分钟使用时使用时开启鼓风，在台面内操作开启鼓风，在台面内操作使用完毕后使用完毕后要用要用75%75%酒精将台面和台内四周擦拭干净，紫酒精将台面和台内四周擦拭干净，紫外照射外照射1010分钟。分钟。COCO2培养箱：培养箱：1.1.设定的条件为设定的条件为37℃37℃，，55％％CO2CO2。。2.2.使用使用CO2CO2培养箱应注意的问题：培养箱应注意的问题：▫▫用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保用螺旋口瓶培养细胞时，需将瓶盖微松，以保证通气。证通气。▫▫保持培养箱内空气干净，定期消毒擦拭。保持培养箱内空气干净，定期消毒擦拭。▫▫箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水30003000毫毫升，以保持箱内湿度。升，以保持箱内湿度。控制水盘内污染的方法：控制水盘内污染的方法：11、定期、定期((至少每两周一次至少每两周一次))，更换水盘内的，更换水盘内的无菌蒸馏水或无菌去离子水。无菌蒸馏水或无菌去离子水。22、在水盘内添加适量硫酸铜，预防真菌污染、在水盘内添加适量硫酸铜，预防真菌污染。配制方法：。配制方法：20g20g无水硫酸铜＋无水硫酸铜＋5ml5ml浓硫酸浓硫酸＋＋1L1L灭菌纯水。灭菌纯水。33、水盘内添加适量抗生素。、水盘内添加适量抗生素。44、定期为培养箱（含水盘）进行一次高温灭菌、定期为培养箱（含水盘）进行一次高温灭菌。。2.2.细胞培养条件细胞培养条件细胞培养器皿：细胞培养器皿：细胞培养瓶：细胞培养瓶：▫▫2525平方厘米（加液量平方厘米（加液量3-5ml3-5ml））▫▫7575平方厘米（加液量平方厘米（加液量10-15ml10-15ml））▫▫150150平方厘米（加液量平方厘米（加液量40ml40ml））细胞培养板：细胞培养板：细胞培养皿细胞培养皿▫▫35mm35mm（加液量（加液量3ml)3ml)▫▫60mm60mm（加液量（加液量5ml)5ml)▫▫100mm100mm（加液量（加液量10ml)10ml)150mm150mm((加液量加液量15ml)15ml)常用培养基：常用培养基：RPMI1640RPMI1640：：适合许多种细胞，如肿瘤细胞、正常细胞的原代培适合许多种细胞，如肿瘤细胞、正常细胞的原代培养、传代培养等。养、传代培养等。尤其适合人白细胞，如尤其适合人白细胞，如H9H9、、HL-60HL-60、、IM-9IM-9和和K-562K-562等细胞系的培养。等细胞系的培养。DMEMDMEM：：DMEMDMEM（（AA））【【不含谷氨酰胺、可高压灭菌不含谷氨酰胺、可高压灭菌】】DMEMDMEM（（HH））【【含谷氨酰胺、高糖型含谷氨酰胺、高糖型（（4500mg/L4500mg/L）、除菌过滤灭菌）、除菌过滤灭菌】】DMEMDMEM（（LL））【【含谷氨酰胺、低糖型含谷氨酰胺、低糖型(1000mg/L)(1000mg/L)、除菌过滤灭菌、除菌过滤灭菌】】血清：血清：常用血清种类：胎牛血清、新生牛血清、小牛血清常用血清种类：胎牛血清、新生牛血清、小牛血清血清的灭活（消除补体活性）血清的灭活（消除补体活性）56℃56℃，，3030分钟分钟。。使用浓度：使用浓度：5%-20%5%-20%，一般，一般10%10%血清的消毒：过滤除菌血清的消毒：过滤除菌血清解冻步骤：血清解冻步骤：––20℃20℃或或––70℃70℃至至4℃4℃冰箱冰箱溶解一天，至室温下全溶后再分装，一般用溶解一天，至室温下全溶后再分装，一般用15ml15ml无菌离心管分装。无菌离心管分装。谷氨酰胺：谷氨酰胺：谷氨酰胺在溶液中很不稳定，谷氨酰胺在溶液中很不稳定，4℃4℃放置放置11周可周可分解分解5050％，故应单独配制，置于％，故应单独配制，置于-20℃-20℃保存保存，临用前加入培养液。，临用前加入培养液。消化液：消化液：胰蛋白酶溶液：胰蛋白酶溶液：常用浓度：常用浓度：0.25%0.25%。。消...
