不同因素对金针菇原生质体制备和再生的影响_陈力力VIP专享VIP免费

图2不同稀释浓度的蜡样芽孢杆菌经hblA引物扩增结果的电泳图(从左到右的菌数分别为9.2×105、104、103、102、101、100)Fig.2AmplificationfragmentsofdifferentdilutionconcentrationB.cereus(fromlefttorighttheconcentrationofB.cereusis9.2×105,104,103,102,101,100CFUΠmlrespectively)图3hblA基因用于实际样品的检测的扩增片段(图中1、5、6、8为致病性腊样芽孢杆菌阳性样品其他为阴性样品)Fig.3Amplificationfragmentsofdifferentsamples3讨论由于蜡样芽孢杆菌及其芽孢广泛存在于周围的环境中,它极易污染食物而引起食物中毒,因此需要发展一种快速的检测方法来实现对致病性腊样芽孢杆菌的检测,从而对食品加工过程进行质量控制,提高食品的安全性。目前对蜡样芽孢杆菌的检测主要采用传统的细菌分离及生化鉴定方法,该方法费时费力,需要长时间进行选择性增菌过程[7-9],本文建立了一种PCR方法,通过扩增致病性蜡样芽孢杆菌的hblA基因来实现对蜡样芽胞杆菌的快速检测。实验结果表明,以hb2lA基因为目的基因设计引物建立的PCR检测方法能特异扩增蜡样芽孢杆菌的hblA基因,且与其他的菌株均交叉反应,其检测敏感性可达9CFUΠml,该方法具有良好的应用前景,其快速、灵敏度高、特异性强,省时省力,易于在实际检验工作中推广应用。参考文献:[1]VesaMantynen,KristinaLindstrom.ArapidPCR-basedDNAtestforen2terotoxicBacilluscereus[J].AppliedandEnvironmentalMicrobiology,1998,64(5):1634-1639.[2]IroshiFukushima,YoshieTsunomori,RyotaroSeki.Duplexreal-timeSYBRgreenPCRassaysfordetectionof17speciesoffoodorwaterbornepatho2gensinstools[J].JournalofClinicalMicrobiology,2003,41(11):5134-5146.[3]HJBach,DErrampalli,KTLeung,etal.SpecificdetectionofthegenefortheextracellularneutralproteaseofBacilluscereusbyPCRandblothybridiza2tion[J].AppliedandEnvironmentalMicrobiology,1999,65(7):3226-3228.[4]BjarneMunkHansen,NielsBohseHendriksen.DetectionofenterotoxicBa2cilluscereusandBacillusthuringiensisstrainsbyPCRanalysis[J].AppliedandEnvironmentalMicrobiology,2001,67(1):185-189.[5]ShoichiYamada,EijiOhashi,NorioAgata,etal.CloningandnucleotidesequenceanalysisofgyrBofBacilluscereus,B.thuringiensis,B.mycoides,andB.anthracisandtheirapplicationtothedetectionofB.cereusinrice[J].Ap2pliedandEnvironmentalMicrobiology,1999,65(4):1483-1490.[6]Yu-HsiuChang,Yung-HuiShangkuan,Hung-ChiLin,etal.PCRas2sayofthegroELgenefordetectionanddifferentiationofBacilluscereusgroupcells[J].AppliedandEnvironmentalMicrobiology,2003,69(8):4502-4510.[7]MonikaEhling-Schulz,MartinaFricker,SiegfriedScherer.IdentificationofemetictoxinproducingBacilluscereusstrainsbyanovelmolecularassay[J].FEMSMicrobiologyLetters,2004,23(2):189-195.[8]ElseMarieFykse,JaranStrandOlsen,GunnarSkogan.Applicationofsoni2cationtoreleaseDNAfromBacilluscereusforquantitativedetectionbyreal-timePCR[J].JournalofMicrobiologicalMethods,2003,55(1):1-10.[9]YMHsieh,SJSheu,YLChen,etal.Enterotoxigenicprofilesandpoly2merasechainreactiondetectionofBacilluscereusgroupcellsandB.cereusstrainsfromfoodsandfood-borneoutbreaks[J].AppliedandEnvironmentalMicrobiology,1999,87(1):481-490.不同因素对金针菇原生质体制备和再生的影响陈力力,马美湖,周传云,高必达(湖南农业大学食品科技学院,湖南长沙410128)摘要:比较了不同浓度裂解酶及组合、渗透压稳定剂、酶解时间等因素对金针菇原生质体得率的影响以及不同渗透压稳定剂、培养基、接种方法等因素对金针菇原生质体再生的影响。试验结果表明:固体培养10d的金针菇菌丝,以0.5molΠLKCl作渗透压稳定剂,加入1%纤维素酶和1%溶菌酶在25℃下酶解1.5h,分离原生质体效果最佳,原生质体产量可达27.8×105个Πml以上;以0.5molΠLKCl作渗透压稳定剂,在25℃条件下,金针菇原生质体采用直接涂布法接种在RCM培养基上培养...