畜牧兽医学报,1999,30(1),1-5ActaVeterinariaetZootechnicaSinicaPMSG及GnRH类似物对鸡卵泡闭锁的调节作用a李莹辉(航天医学工程研究所,北京100094)汪琳仙杨传任(中国农业大学生物学院)摘要本文利用激素诱导的鸡卵泡闭锁模型,探讨了激素在卵泡闭锁中的作用。研究结果表明:PMSG和GnRH类似物LRH-A3均能诱导鸡卵泡闭锁,诱导的卵泡闭锁率分别为48%和42%;闭锁卵泡的形态学、组织学特征明显,类固醇激素合成能力发生逆转,孕酮和雌二醇比值(P/E2)显著升高;闭锁卵泡细胞的小分子量DNA呈现典型的Apoptosis特征。体外培养条件下,FSH和次黄嘌呤能抑制卵泡自发性Apoptosis,PRL不能诱导体外培养的鸡卵泡发生Apoptosis,提示抱窝和注射外源PRL引起的卵泡闭锁可能不是PRL直接作用于卵巢的结果。关键词催乳素,PMSG,GnRH类似物,鸡,卵泡闭锁卵泡闭锁是卵泡发育中必然出现的普遍现象。禽类生产中,闭锁卵泡的数量直接影响产蛋率的高低,闭锁卵泡少的个体进入等级卵泡的卵泡数增多,产蛋序列延长,产蛋率增加。具有抱窝习性的品系产蛋率相对较低[1]。因此了解禽类卵泡发育特点、探讨卵泡闭锁机制,降低卵泡闭锁率在禽类生产实践中具有重要意义和经济价值。催乳素(PRL)升高诱导的抱窝鸡中,有大量卵泡闭锁[2],提示PRL可能在诱导鸡的卵泡闭锁中具有一定作用。本文利用建立的鸡卵泡闭锁模型,从整体和离体两方面探讨了一些激素对卵泡闭锁的调节作用。1材料与方法1.1动物健康,正在产蛋的白莱航鸡,由中国农业科学院畜牧研究所种鸡场提供。1.2药品199培养液Gibco公司产品;表皮生长因子(EGF)、次黄嘌呤(HypoxanthineHX)、胰岛素(Ins)、转铁蛋白(Tf)、谷胺酰胺(Glu)均为Sigma公司产品;羊促卵泡素(oFSH)美国国立卫生研究院的国家激素和垂体机构(NAPP)赠送。羊催乳素(oPRL)北京农业大学生理教研室制备。孕马血清促性腺激素(PMSG)天津医药生物制品厂生产。GnRH类似物LRH-A3宁波市激素厂生产。RIA药盒由中科院动物所提供。1.3方法1.3.1整体条件下激素诱导的卵泡闭锁:选择健康、产蛋规律基本一致的白莱航鸡共15只,分3组,每组5只,在其一个产蛋周期开始的第二天进行处理,见表1。1.3.2闭锁卵泡的形态及组织学观察:根据卵泡的形态特征,统计直径为2～8mm卵泡的闭锁率。制备卵泡的组织学切片,经H·E染色用于组织学观察。a*本课题为国家高等学校博士学科点专项科研基金资助项目。**收稿日期1997-06-25。表1不同激素对鸡卵巢的处理方法Table1Treatmentmethodsofdifferenthormones处理Treatment剂量(/100ul/次)Dose注射部位Placeofinjection注射次数Timesofinjection处理时间(h)TreatmenttimeNaCl0.9mg颈部皮下(Subcutisofneck)196,72PMSG100IU颈部皮下(Subcutisofneck)196LRH-A3100Lg颈部皮下(Subcutisofneck)272(分别在0,12h注射)(Injectioninthe0,12h)1.3.3卵泡中类固醇激素含量测定:用RIA法测定体积基本相同的正常卵泡和闭锁卵泡匀浆液中孕酮(P)和雌二醇(E2)含量。1.3.4卵泡中ApoptoticDNA片段分析:参考Hughen的方法[3],分别提取正常卵泡和闭锁卵泡细胞中小分子量DNA,经1.8%的琼脂糖凝胶电泳,分析比较得到的DNA电泳带。1.3.5离体培养条件下PRL对鸡卵泡发生Apoptosis的影响:取3～4mm大小的新鲜卵泡,经洗涤后放入24孔培养板中(1个卵泡/每孔),加入含有Ins(10Lg/ml)、Tf(5Lg/ml)和Glu(2mmol/L)的199培养液2ml,在含5%CO2、95%空气,37℃水蒸气饱和的培养箱中培养,同时用不同剂量的FSH、PRL等处理卵泡24h后,提取卵泡细胞小分子量DNA,观察比较卵泡细胞的ApoptoticDNA片段。2结果2.1不同激素对卵泡闭锁的影响注射PMSG和LRH-A3均能诱导鸡的卵泡闭锁,见表2。表2体内条件下激素诱导的卵泡闭锁(个/只)Table2Follicularatresiainducedbyhormonesinvivo(number/hen)对照组ControlPMSG处理组PMSGtreatedLRH-A3处理组LRH-A3treated平均卵泡总数TMeannumberoftotalfollicles31.0±1.5839.4±2.2826.2±2.77平均正常卵泡NMeannumberofnormalfollicles28.0±1.9220.6±1.6915.0±1.00平均闭锁卵泡AMeannumberofatreticfollicles3.0±1.4718.8±2.3911.2±0.68平均A/T±SE(%)MeanofA/T±SE10.0±1.848.0±2.0**42.2±1.3****与对照组相比,P<0.01。**Compar...
