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细胞传代标准化步骤VIP免费

细胞传代标准化步骤_第1页
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细胞传代标准化流程:穿戴好白大褂和手套,用75%酒精擦手;1、取出细胞,显微镜下观察细胞形态和密度,确定细胞生长状况,是否需要传代或换液;2、将培养基(如有需要还有血清和大瓶高糖培养基)、PBS、胰酶培养基等预热及超净台消毒结束后,将试剂及细胞等喷酒精后移入超净台,将废液缸喷足酒精移入超净台,取酒精棉放入超净台;3、点燃酒精灯,将瓶口拧松,过火消毒;4、在确定细胞生长状况良好且没有污染的情况下,将培养皿中的培养基取(大培养皿6ml,中培养皿3ml)至一个新的15ml离心管中;(一个1ml枪头)5、用适量PBS清洗细胞表面(大皿5ml,中皿3ml),并弃去PBS;(一个5ml枪头)6、加入适量胰酶消化细胞(大皿1ml,中皿0.5ml),此时可将细胞置于37°C细胞培养箱内消化;(C2C12用5min,3T3-L1用1.5min),(一个1ml枪头)7、待消化完全后,用胰酶6倍体积的完全培养基中止消化,并吹打培养皿皿底,将细胞移入离心管;(一个5ml枪头)8、1000rpm,5min离心,离心间隙可以准备好传代的细胞培养皿,并加好培养基;9、弃上清,口擦酒精,烧口;10、加适量完全培养基吹打混匀细胞(沿壁轻轻吹打24次左右),按合适比例进行细胞传代,在盖上标记好细胞名称、代数及传代日期并放入孵箱。(一个1ml枪头)11、将所有试管收至冰箱,将废液缸及废液取出,装至一次性PE手套,废液缸喷酒精清洗12、用酒精棉仔细擦拭操净台表面,检查显微镜、离心机是否关闭,孵箱是否正常;13、做试验记录,打开超净台和细胞间紫外,15min后关闭

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