第二章 蛋白质样品的制备 3.2VIP免费

Bioinformatics,2010-2011,ShanxiAgriculturalUniversity第二章蛋白质样品的制备第二章蛋白质样品的制备Bioinformatics,2010-2011,ShanxiAgriculturalUniversity蛋白质样品的制备是蛋白质组研究的蛋白质样品的制备是蛋白质组研究的第一步，无论后续采用怎样的分离或鉴定手段，第一步，无论后续采用怎样的分离或鉴定手段，样品制备都是关键步骤。从蛋白质组大规模研样品制备都是关键步骤。从蛋白质组大规模研究的角度而言，要求样品制备尽可能获得所有究的角度而言，要求样品制备尽可能获得所有的蛋白质，但是由于蛋白质种类多、丰度不一的蛋白质，但是由于蛋白质种类多、丰度不一和物化特性多样等，要达到真正的全息制备是和物化特性多样等，要达到真正的全息制备是具有难度的。具有难度的。Bioinformatics,2010-2011,ShanxiAgriculturalUniversityBioinformatics,2010-2011,ShanxiAgriculturalUniversity样品制备的原则样品制备的原则尽可能采用简单方法进行样品处理，以避免蛋白丢失。尽可能采用简单方法进行样品处理，以避免蛋白丢失。细胞和组织样品的制备应尽可能减少蛋白的降解，低温和细胞和组织样品的制备应尽可能减少蛋白的降解，低温和蛋白酶抑制剂以防止蛋白的降解。蛋白酶抑制剂以防止蛋白的降解。样品裂解液应该新鲜配置，并且分装冻存于样品裂解液应该新鲜配置，并且分装冻存于-80℃-80℃。勿反。勿反复冻融已制备好的样品。复冻融已制备好的样品。通过超速离心清除所有的杂质。通过超速离心清除所有的杂质。加入尿素后加温不要超过加入尿素后加温不要超过37℃37℃，防止氨甲酰化而修饰蛋，防止氨甲酰化而修饰蛋白。白。Bioinformatics,2010-2011,ShanxiAgriculturalUniversity一、样品的类型一、样品的类型1.1.整体样品是生物个体小的物种（如微生物），可以整体整体样品是生物个体小的物种（如微生物），可以整体取样。取样。2.2.组织样品有一个采样的过程，就是从整体部分或整批器官组织样品有一个采样的过程，就是从整体部分或整批器官中抽取一定量具有代表性的样品进行实验。中抽取一定量具有代表性的样品进行实验。3.3.细胞样品包括固体基质中培养的细胞、体外悬浮培养生长细胞样品包括固体基质中培养的细胞、体外悬浮培养生长的细胞、周期性细胞样品（如红细胞、淋巴的细胞、周期性细胞样品（如红细胞、淋巴细细胞）和从组织中分离同类的细胞样品。胞）和从组织中分离同类的细胞样品。4.4.可溶性样品是可溶性液体样品，如血清、血浆、尿样、脑可溶性样品是可溶性液体样品，如血清、血浆、尿样、脑脊液以及细胞和组织的水溶性提取物。脊液以及细胞和组织的水溶性提取物。第一节样品破碎与分离蛋白质第一节样品破碎与分离蛋白质Bioinformatics,2010-2011,ShanxiAgriculturalUniversity二、组织与细胞破碎二、组织与细胞破碎为了完全分析所有的细胞内蛋白，组织与细胞必须进为了完全分析所有的细胞内蛋白，组织与细胞必须进行有效的破碎。破碎方法的选择依赖于样品来源（如细行有效的破碎。破碎方法的选择依赖于样品来源（如细胞、固体组织或者其它的生物材料），同时也依赖于这种胞、固体组织或者其它的生物材料），同时也依赖于这种分析是获得所有的蛋白质还是特殊的亚细胞器组分。分析是获得所有的蛋白质还是特殊的亚细胞器组分。蛋白酶在细胞破碎时很可能释放出来，其会导致某些蛋白酶在细胞破碎时很可能释放出来，其会导致某些蛋白质降解而使双向电泳图谱的分析复杂化，因此蛋白质蛋白质降解而使双向电泳图谱的分析复杂化，因此蛋白质样品应该利用蛋白酶抑制剂加以保护。样品应该利用蛋白酶抑制剂加以保护。Bioinformatics,2010-2011,ShanxiAgriculturalUniversity（一）（一）温和的裂解方法温和的裂解方法通常应用于组分比较简单的样品，例如通常应用于组分比较简单的样品，例如组织组织培养的细胞、血细胞和一些微生物，或者用于培养的细胞、血细胞和一些微生物，或者用于分分析某一特定的细胞器，例如只需要裂解胞质蛋白、析某一特定的细胞器，例如只需要裂解胞质蛋白、完整的线粒体或其它的细胞器。有时这些技术联完整的线粒体或其它的细胞...