专题五DNA的粗提取与鉴定VIP免费

§§5.1DNA5.1DNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定一、基础知识一、基础知识（一）提取（一）提取DNADNA的方法的方法1.1.提取生物大分子的基本思路提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法，分离具选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子有不同物理或化学性质的生物大分子2.2.提取提取DNADNA的基本思路的基本思路提取提取DNADNA，去除其他成分，去除其他成分利用利用DNADNA与与RNARNA、、蛋白质蛋白质和和脂质脂质等等在物理和化学性质方面的差异在物理和化学性质方面的差异⑴⑴DNADNA的溶解性的溶解性DNADNA和蛋白质等成分和蛋白质等成分在不同浓度的在不同浓度的NaClNaCl溶液溶液中溶解度不同中溶解度不同利用这一特点，利用这一特点，选择适当的盐浓度选择适当的盐浓度就能使就能使DNADNA充分溶解，充分溶解，而使杂质沉淀；而使杂质沉淀；3.DNA3.DNA等大分子的理化性质等大分子的理化性质⑵⑵DNADNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液⑶⑶DNADNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性DNADNA不溶于酒精溶液，不溶于酒精溶液，但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。将将DNADNA与蛋白质进一步分离。与蛋白质进一步分离。⑵⑵DNADNA不溶于酒精溶液不溶于酒精溶液⑶⑶DNADNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性①①蛋白酶——水解蛋白质，蛋白酶——水解蛋白质，对对DNADNA没有影响没有影响②②高温——大多数蛋白质不能忍受高温——大多数蛋白质不能忍受6060～～8080℃℃而而DNADNA在在80℃80℃以上才会变性以上才会变性③③洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白洗涤剂——溶解细胞膜，去除脂质和蛋白质质但对但对DNADNA没有影响没有影响试剂：试剂：（二）（二）DNADNA的鉴定的鉴定条件：条件：二苯胺二苯胺沸水浴条件下，沸水浴条件下，DNADNA遇二苯胺被染成遇二苯胺被染成蓝色蓝色沸水浴沸水浴现象：现象：（一）实验材料的选取实验材料的选取（二）破碎细胞，获取含破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液（三）除去滤液中的杂质除去滤液中的杂质((纯化纯化))（四）DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定二、实验设计二、实验设计（一）实验材料的选取（一）实验材料的选取从下列材料中选取从下列材料中选取22～～33种种原则：原则：菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞；在液体培养基中培养的大肠杆菌在液体培养基中培养的大肠杆菌凡是含有凡是含有DNADNA的生物材料都可以考虑的生物材料都可以考虑选用选用DNADNA含量相对较高的组织含量相对较高的组织（二）破碎细胞，获取含（二）破碎细胞，获取含DNADNA的滤液的滤液11、动物细胞、动物细胞22、植物细胞、植物细胞————容易破碎容易破碎————需要溶解细胞膜需要溶解细胞膜鸡血细胞溶液（防凝固加柠檬酸钠）鸡血细胞溶液（防凝固加柠檬酸钠）加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液过滤后收集滤液想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？想一想：为什么加入蒸馏水能使鸡血细胞破裂？蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，蒸馏水对于鸡血细胞来说是一种低渗液体，水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；水分大量进入血细胞，使血细胞胀裂；加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，加上搅拌作用，加速鸡血细胞细胞膜、核膜破裂，从而释放出从而释放出DNADNA①①加入一定的洗涤剂和食盐加入一定的洗涤剂和食盐②②充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？想一想：洗涤剂和食盐的作用分别是什么？洗涤剂——能溶解细胞膜，利于洗涤剂——能溶解细胞膜，利于DNADNA释放释放食盐——食盐——NaClNaCl，利于，利于DNADNA的溶解于研磨液中的溶解于研磨液中经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的经研磨可破碎细胞壁，使细胞核内的DNADNA释放。若研磨释放。若研磨不充分，会使提取的不充分...