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hela细胞的培养传代VIP免费

hela细胞的培养传代_第1页
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hela细胞的培养条件为:高糖DMEM培养基,100ml/l胎牛血清;培养液中一般血清含量为10%传代步骤:1.倒去细胞培养液(对于小口的培养瓶可采用顷倒方法,对于培养皿,必须用吸管吸出)2.吸取适量的PBS加入培养瓶中,轻轻振荡后弃去重复一次,以清于血清成分,利于胰酶消化3.加入适量0.25%胰蛋白酶(一般100mm培养皿可加入1ml,15cm培养瓶加入5-8滴)转动培养瓶,使其湿润整个细胞房,高温下消化2-3分钟。翻转培养瓶,肉眼观察细胞单层,见细胞单层薄膜出现针孔大小空隙时即可顷去消化液,如消化程度不够可延长消化时间,或置于37°C孵箱中加速胰酶作用如见大量细胞片装脱落,已消化过头,则不能顷倒消化液而直接进行下一步操作4.加入适量培养液终止消化吸取瓶中培养液反复冲瓶壁上的细胞层,至全部冲下轻轻吹打,混匀,成细胞悬液取样计数,调整细胞浓度为5′10/ml15cm培养瓶培养时,吸取1ml细胞悬液加到新培养瓶中,加入4ml培养液,盖好,置37°C孵箱中培养。传代的天数要以HELA细胞的生长密度为基础,细胞密度大了就要传,应该每天观察HELA细胞,注意其生长状态.HELA细胞的生长分5期:游离期细胞经消化分散后,由于愿生质收缩及细胞弹性,细胞成圆形,折光性强,呈悬浮状态。吸附期接种24小时后,由于细胞的附壁特性,开始贴壁,圆形细胞变成延展状态。繁殖期细胞快速生长、分裂,形成细胞岛直至细胞单层。维持期细胞形成单层后生长与分裂减缓、折光性减弱,细胞内颗粒增多,由于代谢物的积累,CO2增多,培养液变黄。衰退期如不及时换液和传代,由于营养缺乏、代谢物积累,细胞内颗粒进一步增多,立体感差,细胞皱缩、脱落、逐渐衰老死亡。应该在其维持期和衰退期及时换液.一般而言是4天换一次液.

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