酵母菌的分离纯化VIP免费

微生物学课程设计专业：生物技术姓名：符英康学号：1040521125从土样中分离纯化酵母菌一、实验目的1、学习从土壤中分离、纯化微生物的原理玉方法2、学习、掌握微生物的鉴定方法3、对提取的图样进行微生物的分离、纯化培养、并进行简单的形态鉴定二、实验原理1、基本思想:酵母菌常见于含糖份比较高的环境中，如果园土、菜园土及果皮等的表面。多数酵母菌喜欢偏酸条件，最适pH为4.5-6.0.酵母菌生长迅速，容易分离培养。在液体培养基中，酵母菌比霉菌生长快，利用酸性条件则可以抑制细菌的生长。因此常用酸性液体培养基获得酵母菌的加富培养，然后在固体培养基上划线分离纯化。2、基本路线:采样→稀释→接种→鉴定→纯化→保藏菌种三、器材和用品1、器材：小铁铲和无菌纸或袋、培养皿、载玻片、盖玻片、普通光学显微镜、量筒、滴管、吸水纸、无菌水试管、烧杯、三角瓶、电炉、玻璃棒、接种环、恒温培养箱、高温灭菌锅、移液枪（枪头）、天平、滤纸、pH试纸等。无菌吸管3支/组、无菌培养皿、100ml无菌水1瓶/组、涂棒、显微镜、接种环等。2、试剂：a、美兰染液。b、马铃薯葡萄糖琼脂培养基：马铃薯200g（煮开10min后过滤取汁），葡萄糖20g，琼脂20g，水1000ml，pH自然。分装三角瓶；试管斜面1支/组。c、乳酸马铃薯葡萄糖培养液：配方同上，不加琼脂加乳酸，按1000ml培养基加入5ml乳酸，pH为5.5左右，再分装试管9ml2支/组。四、实验方法1、采集土样带上小铁铲和无菌袋到果园土、菜园土等地采集较细碎土壤。2、样品稀释在无菌纸上称取样品5g，放入100mL无菌水的三角瓶中，手摇10分钟使土和水充分混合。用1mL无菌吸管吸取0.5mL注入4.5mL无菌水试管中稀释。3、分离在上述样品稀释液中，吸取lmL，接种灭菌了的马铃薯葡萄糖琼脂培养基上，倒置于37℃温箱中培养48小时。4、加富培养：用无菌吸管取上述培养液1ml，注入另装有乳酸马铃薯葡萄糖培养液中，在28-30℃培养箱中培养24h。5、镜检:用无菌操作法用接种环取少量用无菌操作法用接种环取少量菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，菌液置于载玻片上，中央滴一滴美兰染液，混和混和均匀后制成水浸片，在高倍镜下观察酵母菌的形态及出芽方式，并可根据菌体是否染色来区分酵母菌的死活细胞，因活细胞使美兰染液还原，故菌体不着色。6、涂皿：用马铃薯葡萄糖琼脂培养基溶化后制成平板，用无菌吸管取0.1ml加富培养液到平板中，用涂棒涂匀后培养24h。7、分离纯化：用接种环挑取单个酵母菌菌落，在平板上四区划线，培养后分离得到单个菌落。8、镜检：挑取单菌落，制片观察其形态。9、菌种保藏：接种酵母菌到马铃薯葡萄糖琼脂斜面培养基上，长出菌苔后冰箱保藏。