叶绿素含量测定•实验目的：掌握未经分离的叶绿体色素溶液中测定叶绿素a，b含量的方法及其计算。•试验原理：混合液中两种组分存在时，可通过测定吸光度，根据Lambert－Beer定律计算二者含量。叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b最大吸收峰在645nm。根据Lambert－Beer定律，两种组分的混合液，二组分的浓度C与光密度OD之间的关系如下：•OD663＝Ca·Ka663＋Cb·Kb663•OD645=Ca·Ka645+Cb·Kb645•从文献中查得Ka663为82.04，Kb663为9.27；Ka645为16.75，Kb645为45.60.•通过代数推算，得•Ca＝12.7·OD663－2.69·OD645•Cb＝22.9·OD645－4.68·OD663•CT＝Ca＋Cb＝8.02·OD663＋20.21·OD645•式中单位为mgL－1。•Cc＋x＝（1000D470-3.27Ca-104Cb）/229•=4.37*D470+2.11*D663-9.1*D646•器材与试剂：•实验仪器：高级型分光光度计，离心机，台式天平，见到，研钵，漏斗，移液管。•实验试剂：丙酮，碳酸钙。•实验材料：植物叶片。•实验步骤：•1、色素的提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，称取0.3g放入研钵中加80%丙酮2mL，加适量石英砂及少许碳酸钙，研磨成匀浆，再加80％丙酮2mL，将匀浆转入离心管，并用适量80％丙酮洗涤研钵，一并转入离心管，离心后弃沉淀，上清液用80％丙酮定容至8mL。•2、测定光密度：取上述色素提取液1mL，加80％丙酮4mL稀释后转入比色杯中，以80％丙酮为对照，分别测定663nm、645nm处的光密度值。•3、按公式计算叶绿素a，b及总叶绿素含量。再根据稀释倍数分别计算每克鲜重叶片中色素含量。
