二元手性选择体系毛细管电泳/电化学分离检测手性药物酚苄明对映体刘秋英陈丽陈素娟谢天尧3(中山大学化学与化学工程学院,广州510275)摘要采用羟丙基2β2环糊精(HP2β2CD)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)组成的二元手性选择剂体系,以8mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)+10mmol/L柠檬酸(Cit)+10mg/LHPMC+25mmol/LHP2β2CD为电泳运行液,在熔融石英毛细管(50μmi.d.×45cm)中,分离电压+15kV,方波安培检测,手性药物酚苄明对映体获得良好的基线分离,线性检测范围为4～105μmol/L,检出限为1.5μmol/L。对影响灵敏度和分离度的电泳运行液组成、手性选择剂(HP2β2CD、HPMC)浓度以及进样方式和样品介质等进行了详细讨论。应用于市售盐酸酚苄明片剂中酚苄明对映体的分离检测,取得满意结果。关键词毛细管电泳,电化学检测,手性药物分析,二元手性体系,酚苄明2006209209收稿;2007202212接受本文系广东省自然科学基金(No.031589)和中山大学学生科研计划项目3E2mail:cesxty@mail.sysu.edu.cn1引言酚苄明(phenoxybenzamine)为长效α2肾上腺素受体阻滞药,多用于前列腺增生症引起的非机械性梗阻所致的排尿困难,也有文献报道在临床应用中引起下肢不宁综合症的个例和不良副反应[1～3]。酚苄明分子结构中含有一个手性碳,属手性药物分子。有关酚苄明的分析测定方法已有诸多文献报道,但其对映体的分离分析则较少且更有临床意义[4]。毛细管电泳(CE)由于其低耗、快速、高效及环境友好等特点而成为手性药物拆分中颇具吸引力的分析方法[5,6]。本研究应用毛细管电泳2方波安培检测法[7,8],在熔融石英毛细管(50μm×45cm)中,采用羟丙基2β2环糊精(HP2β2CD)和羟丙基甲基纤维素(HPMC)组成的二元手性选择剂体系,以8mmol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)+10mmol/L柠檬酸(Cit)+10mg/LHPMC+25mmol/LHP2β2CD为电泳运行液,分离电压+15kV,酚苄明对映体在18min内实现了良好的基线分离,分离度较单一手性选择剂有明显的改善。2实验部分2.1仪器和试剂CES2003毛细管电泳仪,包括高压电源、方波安培检测器、毛细管电泳数据工作站(中山大学化学与化学工程学院研制);pHS23C精密酸度计(上海伟业仪器厂);石英毛细管柱(50μm×45cm;河北永年光导纤维厂);CQ22B型超声波清洗器(明珠电器有限公司)。酚苄明对照品(Sigma公司,外消旋体由广州药品检验所提供);HP2β2CD(取代度为5～6,一鸣精细化工有限公司,经提纯);三羟甲基氨基甲烷(Tris,上海化学试剂采购供应站);柠檬酸(citricacid,广州化学试剂厂);羟丙基甲基纤维素(HPMC,山东赫达有限公司,经提纯);所用其它试剂均为分析纯,水为超纯水。2.2缓冲液和样品溶液的配制分别配制0.1mol/L柠檬酸和三羟甲基氨基甲烷(Tris),100mg/L羟丙基甲基纤维素(HPMC)和100mmol/LHP2β2CD储备液。实验时,按比例移取储备液配制各种不同浓度和不同pH值的电泳运行液。酚苄明对照品配成1g/L的储备液,进样时用50μmol/L柠檬酸+25mmol/LHP2β2CD溶液稀释到所需浓度。第35卷2007年8月分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报ChineseJournalofAnalyticalChemistry第8期1191～11942.3样品制备取5片市售盐酸酚苄明片剂(河南竹林众生制药股份有限公司豫中制药厂,批号国药准字H10910024,标示值5mg/片),研匀后加20mL超纯水在超声波上溶解10min。药液通过0.45μm的醋酸纤维膜,定容于50mL的容量瓶中。用微量移液器移取一定量的上述溶液,再用50μmol/L柠檬酸+25mmol/LHP2β2CD溶液稀释至合适的浓度,进样分析。2.4实验方法毛细管柱在使用前依次用0.1mol/LΝaOH、超纯水和电泳运行液各冲洗毛细管柱5min;电化学检测池(含检测电极)在超声波清洗器中进行清洗。电极和电化学检测池的制作方法参见文献[7]。分离电压为+15kV,电动进样:10kV×5s。检测器的输出信号经数据工作站采集到微机中进行实时数据处理、图形显示和数据文件存储。实验在室温(25℃)、相对湿度<75%的实验环境下进行。3结果与讨论3.1HP2β2CD、HPMC浓度的影响实验结果表明,HP2β2CD可使酚苄明对映体实现部分的分离,但无法达到基线分离效果,这与文献结果[5]较为一致。实验发现,在上述运行液中添加少量羟丙基甲基纤维素(HPMC)可使对映体的分离度明显增加。当HPMC为10mg/L时可使酚苄明对映体达到完全的基...
