24/12/291实训三细菌染色法24/12/2921.细菌染色法革兰染色法复染色法单染色法负染色：正染色死菌活菌：抗酸染色法芽孢染色法姬姆萨染色法荚膜染色法用美蓝或TTC等作活菌染色24/12/293常用染料碱性染料：带正电荷，如美蓝、结晶紫、碱性复红等酸性染料：带负电荷，如伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料染色中性染料：又称复合染料，如伊红美兰、伊红天青等2.染色原理：小、色差染色法：简单、革兰染色24/12/2943.染色方法（1）单染色法：菌种－－枯草芽孢杆菌（观察芽孢）（2）革兰染色法：菌种－－金黄色葡萄球菌或大肠埃希菌（观察革兰染色性）24/12/295涂片干燥固定结晶紫1min（1）单染色步骤：枯草芽孢杆菌镜检水洗水洗干燥干燥记录结果教师评分无菌操作两环菌液直径约1cm晾干烘干等全干过外焰3次目的不烫染液不干全干再看用油镜24/12/296（2）经典染色法－－革兰染色法革兰阳性菌G+（紫色）革兰阴性菌G-（红色）革兰染色法由丹麦医生革兰于1884年创立。24/12/297涂片干燥固定结晶紫1min碘液1min水洗水洗95％乙醇30s水洗水洗蕃红2-3min水洗水洗镜检水洗水洗干燥干燥Gram.swf革兰染色步骤:金黄色葡萄球菌或大肠埃希菌24/12/298革兰染色原理：①壁结构、成分差异。（主）G＋菌壁厚、密,脂类少,乙醇不易渗入脱色G－菌壁薄、疏,脂类多,乙醇易渗入脱色②等电点不同。G＋菌的低，结合阳性染料多G－菌的高，结合阳性染料少③细胞内核糖核酸镁盐含量不同。G＋菌的多，染料结合牢固，难脱色G－菌的少，易脱色24/12/299G+（紫）×1000G—（红）×1000革兰染色意义:鉴别；致病性；药物选择24/12/2910革兰染色影响因素：菌龄—培养18-24小时的幼龄菌涂片厚度—宜薄不宜厚各试剂作用时间脱色时间—关键步骤，一般30秒过长—假阴性过短—假阳性24/12/29114.实训结果:2片/人,单染色30分;革兰染色50分评分标准：①染色结果是否正确②找到目标③是否最佳目标④目标是否清晰⑤光线是否适宜菌名颜色革兰染色性放大倍数教师评分单染:枯草芽孢杆菌×24/12/29125.思考题：1和26.实训总结：（实训结束后完成）分析实训过程的收获、存在的问题和解决的方法
