※生物工程食晶科学．2008,V01．20,No．07263■III——●●■______■_—●——●—■■■■■●■■■—■—■■■■—■■■■—■●—●■■■■■—————■—■■—●————■隐孔雀石绿半抗原与全抗原设计、合成及鉴定沈玉栋，王宇，孙远明，雷红涛，王弘，肖治理(广东省高等学校食品质量安全重点实验室，华南农业大学食品质量安全研究所，广东广州s10642)摘要：从偶联位点、偶联活性基团的性质及半抗原的合成与偶联方法分析，设计了系列不同结构的半抗原和人工抗原及其合成方法。以N，N．二甲基苯胺、苯甲醛衍生物为原料，Amberlyst15树脂为催化剂，在温和条件下合成出3种隐孔雀石绿半抗原；进一步采用活泼酯和莺氮化法分别将获得的半抗原与牛血清白蛋白(BSA)偶联，形成相应全抗原。半抗原和全抗原分别经减压硅胶柱色谱及透析纯化后，采用质谱、核磁共振及紫外扫描光谱等分析手段进行了鉴定，结果表明半抗原及免疫全抗原均合成成功，满足了进一步免疫、筛选高质量抗体和建立检测方法的需要。同时，采用分子模拟手段对抗原表面半抗原决定簇的前线分子轨道分布情况进行了仿真模拟分析，讨论了前线轨道的分布可能对抗体特性造成的影响，为进一步的半抗原构效关系研究提供理论支持。关键词：孔雀石绿；半抗原；全抗原；合成；鉴定Design，SynthesisandIdentificationofLeucomalackiteGreenHaptensandCompleteAntigensSHENYu—dong，WANGYu，SUNYuan—ruing，LEIHong·tao，WANGHong，XIAOZhi—li(roodQualityandSafetyKeyLaboratoryofUniversityofGuangdongProvince，InstituteofFoodQuali哆andSafety,SouthChinaAgriculturalUniversity，Guangzhou510642，China)Abstract：Severalcompleteantigenswerepreparedtoproducetheantibodiesforleucomalachitegreen．Threehaptens(4-MGC，3-MGNand4-MGN)withdifferentactivegroupsandlinkersubstitutionpatternsweresynthesizedfacilelywithN，N-dimethylanilineandbenzaldehydederivativesasrawmaterials．The4-MGC，3-MGNand4-MGNwereconjugatedtobovines唧malbumin(BSA)withactiveesteranddiazotizationmethodrespectivelytoformthreecompleteantigens．Theratiosof4_MGC，3-MGN，and4-MGNtoBSAareprovedas40：1，15；1and13：lrespectivelybyUVspectraanalysisandIxiniU'obcnzenesulfonicacid(TNBS)method．Frontiermolecularorbital(FMO、distributionofconjugaten删cswasanalyzedsuccessfullybymolecularmodeling．Theresearchlaysafoundationforfurtherdiscoveringthestructure-activityrelations(SAR)ofsmallmoleculehaptensanddevelopingantibodyandimmunoassaymethod．Keywords：malachitegreen；hapten；completeantigen；synthesis；identification中图分类号：$859；0625．6文献标识码：A文章编号：1002-6630(2008)07-02634}4孔雀石绿(malachitegreen，MG)属三苯甲烷类染料，曾广泛用于预防和治疗各类水产动物的水霉病、鳃霉病和小瓜虫病等⋯。近年来研究表明，孔雀石绿在生物体内主要以代谢物隐孔雀石绿(1eucomalachitegreen，LMG)形式存在，对人体有致畸、致癌和致突变的危险性【2．41。目前，欧盟及美国等均已禁止孔雀石绿用作渔药。我国也于2002年5月将孔雀石绿列入《食品动物禁用的兽药及其化合物清单》(农业部公告193号)。然而，受价格低廉及水霉病防治效果较好等利益驱使，孔雀石绿l／N图1孔雀石绿结构Fig．1StructureofMG收稿日期：2007—08．12基金项目：广东省自然科学基金项目(06300421)；粤港关键领域重点突破项目(2006A25005002)；华南农业大学校长基金项I；t(5100-k06133)作者简介：沈玉栋(1977．)，男，讲师，博士，主要研究方向为食品安全。E—mail：shenyudong@scau．edu．cn万方数据2642008,V01．29,No．07目晶科宇※生物工程■■一■——I●●■■■■■●■●●■■■●■●■■●■■■■■●■■■■■■■■■■■■●■■—■■一f．／N豳2隐孔雀石绿结构Fig．2StructureofLMGlN＼非法滥用现象依然严重，由此造成对人体的潜在危害不容忽视。孔雀石绿及隐孔雀石绿残留检测主要是气相色谱法和...
