自体骨髓间充质干细胞复合去抗原牛松质骨载体修复兔桡骨节段性骨缺损_江兵VIP免费

自体骨髓间充质干细胞复合去抗原牛松质骨载体修复兔桡骨节段性骨缺损江兵1孔荣2朱六龙2张文志2【摘要】目的:探讨以自体骨髓间充质干细胞(MSCs)复合去抗原牛松质骨载体(BCB)修复兔桡骨节段性骨缺损的效果。方法:抽取20只新西兰大白兔的骨髓并分离、培养、扩增和建立诱导MSCs,将其和BCB复合。手术建立兔双桡骨干15mm骨骨膜缺损的动物模型,实验侧植入MSCsΠBCB,对照侧植入BCB,通过X线、组织学检查等手段观察不同时相的骨缺损修复情况。结果:在第12周时,实验侧骨缺损得到骨性修复,对照侧则未能修复。结论:MSCs在体内能成骨,MSCsΠBCB能有效地修复节段性骨缺损。【关键词】间充质干细胞;去抗原牛松质骨载体;骨缺损;修复【中图分类号】R318【文献标识码】A【文章编号】1671-7163(2005)03-0195-04RepairingRadialSegmentalDefectsinRabbitswithMesenchymalStemCellsandAntigen-extracitedBovineCancellousBonecarrierJiangBing,KongRong,ZhuLiulong,etal.(DepartmentofOrthopaedics,AnhuiProvincialHospital,Hefei230001)【Abstracts】Objective:Tostudytheefficacyofantigen-extracitedbovinecancellousbonecarrier(BCB)loadedwithautologousbonemarrowmesenchymalstemcells(MSCs)onthehealingofrabbitradialsegmentaldefects.Methods:AutologousMSCswereisolatedinvitro,thenimplantedintotheBCB.Anexperimentalmodelof15mmbonedefectwasmadeinthebilateralradiusof20rabbits.Intheexperimentalgroup,theMSCsΠBCBwasimplantedintooneradialsegmentaldefectandtheBCBwasimplantedintotheotherone.Aftertheoperation,serialradiographicexaminationandhistologicalanalysiswereundertaken.Results:Intheexperi2mentalgroup,thebonedefectshealedby12weeks,butinthecontrolgroup,theydidnot.Conclusion:MSCscanformboneinvivoandMSCsΠBCBcanrepairsegmentaldefects.【KeyWords】Mesenchymalstemcell;Antigen-extracitedbovinecancellousbonecarrier;Bonedefect;Repair收稿日期:2004204226基金项目:安徽省重点科研项目(编号:01023022)作者单位:1蚌埠医学院2001级骨科硕士研究生安徽蚌埠233003(现在安庆市立医院骨科安徽安庆246003)2安徽省立医院骨科由于肿瘤、外伤等原因引起的大段骨缺损的修复是骨科领域中一个常见而又棘手的问题。传统的治疗方法有自体骨移植、异体或异种骨移植等,均存在着局限性和不足之处。近年来,随着组织工程学的发展,为解决大段骨缺损这一临床难题展示了一条新的途径。为此,我们将兔自体骨髓间充质干细胞(MSCs)与去抗原牛松质骨载体(BCB)相结合,构建人工骨,探索修复兔桡骨节段性骨缺损的可行性。1材料与方法1.1实验材料主要试剂:低糖DMEM培养液、胎牛血清、胰蛋白酶等,均是GIBCO公司产品。实验动物:新西兰大白兔(购自安徽医学研究所)。1.2实验方法1.2.1BCB的制备[1]:用新鲜小牛四肢长骨干骺端松质骨制成15mm×15mm×15mm的骨块,用56℃压力水反复冲洗4h后沥干,1ml:1ml氯仿Π甲醇混合液脱脂12h,8.8molΠLH2O2脱蛋白24h,于0.6molΠL盐酸内脱钙5min,用双蒸水反复冲洗至PH6.0,冻干制成BCB后灭菌保存备用。1.2.2兔骨髓间充质干细胞的分离、培养和诱导:取3～4月龄健康的新西兰大白兔20只,体重约2.5～3.0kg,雌雄不限。用2.5%硫喷妥钠(1mlΠkg)静脉麻醉后,在无菌条件下抽取新西兰大白兔双侧股骨大转子处骨髓各2ml,充分混匀置于含10%FBS的肝素化(25μΠml)的DMEM基础培养液10ml中(内含青链霉素各100μΠml),再加含10%FBS的DMEM基础培养液11ml混匀后接种于25ml培养瓶中,置于37.0℃、5%CO2的培养箱中孵育。4d后半量换液,1周后完全换液、以后每隔3d换液1次,待细胞贴壁汇合达90%时,用0.25%胰酶消化后按1:3比例传代,并改用含10%FBS的DMEM诱导培养液(内含地塞米松10mmolΠL、β-磷酸甘油钠10mmolΠL,维生素C50μgΠml)继续培养。待第3代细胞汇合达90%时进行消化后配成5×107个Πml浓度的细胞悬液100μl,将细胞悬液点状均匀接种于BCB中,置于六孔培养板中于温箱中继续培养4h后,再加入诱导培养基继续培养24h后备用。将单纯BCB置于六591解剖与临床2005年第10卷第3期AnatomyandClinicsVo...