收稿日期!!""#$"#$!%!修回日期!!""#$%%$%#作者简介!贾娟娟"%*’*!#$女"汉族#$河南人$硕士$免疫分析专业第!"卷第%期!""’年!月同!位!素+,-./01,234,5,6748,19!"!:,9%;7<9!""’人胰岛素酶联免疫分析法的建立贾娟娟!刘一兵!陈!键!许文革!官国英!韩世泉"中国原子能科学研究院同位素研究所$北京!%"!)%&#摘要!采用两株抗胰岛素单克隆抗体$一株包被聚苯乙烯板%另一株标记辣根过氧化物酶$建立了测定人胰岛素的双抗体夹心酶联免疫分析法&方法学研究表明$本方法的灵敏度为%9’=3f’>$曲线范围(!%#"=3f’>$批内%批间变异系数分别小于%%@%%(@$回收率*#9)@!%%%9%@!高浓度胰岛素血清样品系列倍比稀释后测定$测定值与稀释度呈线性相关$相关系数"9**U!&U例健康人血清样品测定值为&9#!%"9U=3f’>&该方法与人胰岛素放射免疫分析法测定结果的相关性良好$*Z"9*’&关键词!胰岛素!单克隆抗体!酶联免疫分析!放射免疫分析中图分类号!^&*!$&&!jU%)9*!!文献标识码(B!!文章编号(%"""$’(%!"!""’#"%$""!)$"(@R#P1)’./*1RA#,)+-’,P,V6A#M*,X#20AAJ,+1+(.#,)311’6-+(0,1J/*,+3B+-0/$c-0/$>3fbD$3TB#9E/7,25F70/5D<,?D74D4D==,0/?5F7.7$G,N7.ID4*#9)@!%%%9%@9AF7D/5.0$0/?D/57.0440IQ80.7<71,J%%@0/?%(9"@.7$467G5DN71I9AF7G,..7105D,/G,722DGD7/5<75J77/=704-.7?0/?G1D1-57?N01-74D4"9**U0257.47.D01?D1-5D,/4,25F740=6174-4D/HFDHFG,/G7/5.05D,/,2D/4-1D/9AF7N01-72,./,.=0140=6174"$Z&U#D4&9#!%"9U=3f’>9Q,=60.7?JD5F^3B$5F7G,..7105D,/G,722DGD7/5D40GG7650<17"*Z"9*’#95#67+(21(D/4-1D/!=,/,G1,/010/5D<,?I!7/LI=7$1D/P7?D==-/,4,.<7/50440I!.0?D,D=$=-/,0440I!!糖尿病"]D0<7574M711D5-4$]M#是一种多病因的代谢性疾病$特点是慢性高血糖%伴随因胰岛素分泌减少或作用缺陷引起的糖%脂肪和蛋白质代谢紊乱&糖尿病在我国及全世界发病率都很高$并发症问题也非常严重&临床诊断中$血液胰岛素含量的测定对于了解糖尿病的发生%发展%预后及制定适当的治疗方案非常重要)%*&%*(*年b011,J等)!*首次应用放射免疫分析法测定胰岛素&)"余年来$胰岛素的免疫测定方法有了很大改进$为避免放射性的使用$酶联免疫分析%发光免疫分析等先后发展起来)&!#*&在实际应用中$与放射免疫分析方法相比$酶联免疫分析也显示出了众多的优越性!’"#由于受血液中胰岛素不均一性的影响$采用双抗体夹心法的酶联免疫分析较放免法测定胰岛素的特异性增高!U$*"$因此$本工作拟建立人胰岛素酶联免疫分析方法#8!实验材料T67G5.0酶标仪%奥地利T>A公司产品&*#孔酶标板%美国Q,450.公司产品&抗胰岛素单克隆抗体分别由_D,?74DH/公司’原子高科股份有限公司提供&胰岛素’辣根过氧化物酶(C^X)’四甲基联苯胺(AM_)’过氧化氢(C!E!)%均为美国TDH=0公司产品&胎牛血清%北京元亨圣马生物技术研究所产品&胰岛素放射免疫分析试剂盒%原子高科股份有限公司提供&胰岛素酶联免疫分析试剂盒%瑞典M7.G,?D0公司产品&人血清样本由中国核工业北京)"%医院提供&实验所用化学试剂均为分析纯#包被缓冲液%"9%=,1*>6C*9(碳酸盐缓冲液&封闭液%含%@_TB的"9"(=,1*>6C’9)磷酸缓冲液(X_)&酶标抗体稀释液%含"9!@_TB’"9"(@AJ77/的"9"!(=,1*>6C’9)X_&洗涤液%含"9"(@AJ77/的"9"!(=,1*>6C’9)X_#!!实验方法!:8!人胰岛素单克隆抗体酶标试剂的制备!8$"称取"9(=HC^X溶于"9"(=>双蒸水中$搅拌下加入新鲜配制的"9"#=,1*>高碘酸钠(:03E))水溶液"9"(=>$)V静置&"=D/&搅拌下加入"9%#=,1*>乙二醇水溶液"9"(=>$室温下静置&"=D/&将"9(=H(%’")>)抗胰岛素单克隆抗体的水溶液加入上述溶液中$混匀后$装入透析袋对"9"(=,1*>6C*9(的碳酸盐缓冲液)V透析过夜&次日$将溶液自透析袋取出$加入"9"!=>((H*>)新配制的硼氢化钠蒸馏水溶液$混匀$)V静置!F&装入透析袋在)V下对"9"!=,1*>6C’9)...
