纤维素酶产生菌的筛选VIP免费

一420一江苏农业科学2010年第3期齐海萍，胡文忠，范圣第，等．纤维素酶产生菌的筛选[J]．江苏农业科学，2010(3)：420422．纤维素酶产生菌的筛选齐海萍，胡文忠，范圣第，朴海月，郑冬明，隋媛(大连民族学院生命科学学院／教育部国家民委重点实验室，辽宁大连116600)摘要：从自制腐烂稻草及附近土壤筛选分离到一株高纤维素酶活性的纤维素分解菌可一8，经初步鉴定为根霉菌。经紫外诱变后，该菌羧甲基纤维素酶活性最高达11．07—14．5IU／mL，对滤纸有较强的降解能力，并且具有稳定的遗传性。该菌最适生长条件温度为30℃，pI-I值为5。关键词：纤维素分解菌；筛选；纤维素酶；鉴定中图分类号：Q814文献标志码：A文章编号：1002—1302(2010)03-0420-03纤维素酶(cellulose)又称纤维素酶系，是一类复杂的复合物，是所有参与降解纤维素并将其最终转化为葡萄糖的各种酶的总称，分为真菌纤维素酶和细菌纤维素酶。由于细菌纤维素酶活性和产量低，工业应用前景不大，故目前的研究主要针对真菌纤维素酶。近年来，利用微生物所产生的纤维素酶将秸秆转化为营养价值较高的蛋白质饲料备受人们的青睐。而至今未能大量把纤维素类物质作为饲料生产原料，其主要原因之一是生产上缺乏高纤维索酶活的菌¨1。选取优良的产纤维素酶菌种是提高纤维素酶活力的关键。不同微生物合成的纤维索酶在组成上有显著的差异，对纤维素的酶解能力也不大相同。由于放线菌的纤维素酶产量极低，研究很少。细菌的产量也不高，主要是葡聚糖内切酶，且大多数对结晶纤维素没有活性，所产生酶是胞内酶或吸附在菌壁上，很少能分泌到细胞外，增加提取纯化难度，在工业上很少应用。因此，筛选具有高活性纤维素酶的秸秆降解微生物菌株以及相关研究是当前研究的热点和难点。本研究从自制的腐烂稻草及土壤的特殊生境中，筛选出一株高纤维素酶活力真菌菌株ZJ一8，对于研究纤维素酶作用机理及生产中纤维素的降解具有潜在理论和应用价值。1试验材料化学试剂均采用分析纯。1．1纤维素分解茵的分离样品①自制牛肉膏蛋白胨培养液：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl5g，H201000mL，pH值为7．0—7．2，在121oc灭菌20rain，将稻草粉加入水和牛肉膏蛋白胨培养液在28℃培养箱中培养。②土壤浸出液。1．2纤维素分解茵的分离、纯化培养基①羧甲基纤维素培养基心1：EMC—Na15g，NH。N031g，收稿日期：2010一Ol一08基金项目：国家民委支持项目。作者简介：齐海萍(1973一)，女，辽宁沈阳人，博士，讲师，研究方向为食品生物技术。通信作者：胡文忠，男，博士，教授，研究方向为食品生物技术。酵母膏19，MgS04·7H200．5g，KH2P04lg，H201000mL。②纤维素刚果红培养基po：K2HPO。0．5g，CMC—Na1．88g，Mgso。·7H200．25g，明胶2g，刚果红0．2g，琼脂14g，土壤浸出液100mL，H20900mL，pH值为6—7。③PDA培养液：马铃薯200g，蔗糖20g，水1000mL。④赫奇逊培养液HJ：KH2P041g，CaEl20．1g，Mgs04·7H200．3g，NaCl0．1g，FeEl30．01g，NaN032．5g，H201000mL，pH值为7．2—7．3。⑤纤维素琼脂培养基拉3：(NH,)：SO。2g，Mgs04·7H：01g，NaCl1g，CaC032g，琼脂20g，水500mL，121oC灭菌20min倒平板后，盖上与平板大小一致的无菌滤纸。⑥固态发酵培养基：稻草粉(取稻草，切成2—4cnl小段，机器打碎，过60目筛)7g，麸皮3g，(NH4)：so,2g，H2020g，分装入锥形瓶，121℃灭菌20min。2试验方法2．1简要流程图1为纤维素分解菌筛选的简要流程。菌源l平板筛／＼CMC-Na刚果红＼／复筛／＼滤纸失重率固态酶曲培养图1纤维素分解菌的筛选2．2纤维素分解茵的分离与纯化将样品置于无菌三角瓶中，加入10倍体积无菌水打散均匀后，取5mL悬液加入盛有50mL富集培养基(纤维素琼脂培养基)的三角瓶，在28℃和150r／rain下，振荡培养3—5d后移取5mL培养液至另一盛有新鲜富集培养基的三角瓶中继续培养。取富集后的培养液做系列稀释梯度lO～、10一、10～、lO一、10～，分别先后涂布于筛选纤维素琼脂平板和刚果红培养基平板，置于30℃培养箱中培养。分别挑选出透明圈大的真菌，接种斜面保存以备用。2．3滤纸失重率将赫奇逊培养液分装在500mL锥形瓶中，将1张滤纸预万方数据齐海萍等：纤维素酶产...