第29讲微生物的利用、浅尝现代生物技术章知识内容考试属性及要求考查频率加试微生物的利用1.大肠杆菌的培养和分离2.分离以尿素为氮源的微生物实验与探究能力(1)能独立完成“生物知识内容表”所列的生物实验(活动)，包括理解实验目的、原理、方法和操作步骤，掌握相关的操作技能，并能将这些实验涉及的方法和技能进行综合运用。(2)具备验证简单生物学事实的能力，能设计实验，提出或完善实验思路，能对实验现象和结果进行处理、分析和解释。(3)具有对一些生物学问题进行初步探究的能力，能提出问题、做出假设和预期、确认变量、设计实验方案、处理和解释数据、做出合理的判断，能对一些简单的实验方案做出恰当的评价和修订。2015年10月第32题(1)(3分)2016年10月第32题(一)(7分)2017年4月第32题(一)(1)(2分)酶的应用3.果汁中的果胶和果胶酶4.α－淀粉酶的固定化及淀粉水解作用的检测2016年4月第32题(一)(7分)2016年10月第32题(一)(4)(1分)生物技术在食品加工中的应用5.果酒及果醋的制作6.泡菜的腌制和亚硝酸的测定2017年4月第32题(一)(2)(3)(5分)浅尝现代生物技术7.植物的组织培养2015年10月第32题(3)(5)(3分)考点一微生物的利用一、大肠杆菌的培养和分离1.大肠杆菌(1)特性：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。(2)细菌的繁殖：以分裂的方式繁殖，分裂速度很快。2.细菌的扩大培养扩大培养用LB液体培养基。3.分离划线分离用LB固体平面培养基。培养基灭菌↓倒平板↓接种↓划线分离↓培养观察↓菌种保存50mLLB液体培养基和50mLLB固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌将培养基分别倒入4个灭菌后的培养皿中，水平放置，使之形成平面在装有液体培养基的三角瓶中接种大肠杆菌，培养12h用接种环在接种有大肠杆菌的三角瓶中蘸菌液一次，在固体培养基的平板上连续划线，盖好培养皿培养皿倒置(盖在下面)，放在37℃恒温培养箱中培养12～24h，可看到划线的末端出现不连续的单个菌落在无菌操作下将单菌落用接种环取出，再用划线法接种在斜面上，37℃培养24h后，置于4__℃冰箱中保存4.消毒和灭菌比较条件结果常用方法应用范围消毒较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物紫外线消毒法接种室、超净台化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源灭菌强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子灼烧灭菌法接种工具干热灭菌法玻璃器皿、金属工具高压蒸汽灭菌法培养基及容器的灭菌过滤除菌不能加热灭菌的化合物，要用G6玻璃砂漏斗过滤二、分离以尿素为氮源的微生物1.菌种特点含有脲酶，可以通过降解尿素作为其生长的氮源。2.培养基用以尿素为唯一氮源的培养基培养，以LB全营养培养基为对照。3.实验原理(1)筛选以尿素为氮源的微生物，可使用以尿素为唯一氮源的选择培养基进行培养选择。(2)细菌合成的脲酶能将尿素分解成NH3，致使pH升高，使酚红指示剂变红。4.实验步骤制备培养基：将已灭菌的LB固体培养基和尿素固体培养基分别倒入两个培养皿中，摇匀，平放至凝固↓制备细菌悬液：用1g土样和无菌水配制不同浓度的细菌悬液↓用涂布分离法分离细菌：将不同浓度的土壤稀释液分别加入到有LB培养基和尿素培养基的培养皿中，每个浓度分别各接种到三个培养皿中，并用玻璃刮刀涂布到整个平面上↓培养：将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24～48h↓观察：培养基中菌落数量5.反应的鉴定在配制培养基时，加入指示剂酚红，培养时细菌将尿素分解产生碱性的氨，使培养基上菌落周围出现红色的环带。6.微生物接种的两种常用方法比较比较划线分离法涂布分离法工具接种环玻璃刮刀原理通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以分离到由一个细菌细胞繁殖而来的肉眼可见的细胞群体，即菌落将菌液用无菌水进行梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别用涂布器涂布到固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细菌细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落特点方法简单，但不适宜计数单菌落更易分开，但操作复杂些目的使培养基上形成单个细菌细胞繁殖而来的子细胞群体——菌落1.(...
