课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段一、学习目标1.了解PCR技术的基本操作2.理解PCR的原理3.讨论PCR的应用二、学习重点难点PCR的原理和PCR的基本操作三、学法指导:小组合作交流一对一检查过关四、自主学习一基础知识1.PCR原理填写下列表格参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶DNA母链合成子链的原料DNA聚合酶引物DNA的两条链是反向平行的,通常将DNA的羟基末端称为,而磷酸基团的末端称为。DNA聚合酶不能开始合成DNA,而只能,因此,DNA复制需要引物。DNA的合成方向总是。在DNA的复制过程中,复制的前提是。在体外可通过控制来实现。在的温度范围内,DNA的双螺旋结构将解体,双链分开,这个过程称为。PCR利用了DNA的原理,通过控制温度来控制双链的解聚与结合。由于PCR过程的温度高,导致DNA聚合酶失活,后来的DNA聚合酶的发现和应用,大大增加了PCR的效率。PCR反应需要在一定的缓冲溶液中提供:,,,,同时通过控制温度使DNA复制在体外反复进行。2.PCR的反应过程PCR一般要经历循环,每次循环可以分为、和三步。从第二轮循环开始,上一次循环的产物也作为模板参与反应,并且由延伸而成的DNA单链会与结合,进行DNA的延伸,这样,DNA聚合酶只能,使这段固定长度的序列成指数扩增。3.实验操作在实验室中,做PCR通常使用,它是一种薄壁塑料管。具体操作时,用微量移液器,按PCR反应体系的配方在中依次加入各组分,,再参照下表的设置设计好PCR仪的循环程序即可。4.操作提示为避免外源DNA等因素的污染,PCR实验中使用的、、以及蒸馏水等在使用前必须进行。PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份,并在储存。使用前,将所需试剂从冰箱拿出,放在冰块上缓慢融化。在微量离心管中添加反应成1分时,移液管上的枪头要。2