大豆卵磷脂DNA的提取方法及应用VIP免费

大豆卵磷脂DNA的提取方法及应用韩建勋，吴亚君，王斌，杨海荣，陈颖(中国检验检疫科学研究院，北京，100123)摘要以大豆卵磷脂为研究对象，比较了CTAB法、磁珠试剂盒法以及硅胶膜试剂盒法等3种DNA提取纯化方法。通过大豆内源基因Lectin实时荧光PCR检测，发现CTAB法提取的大豆卵磷脂DNA质量优于其它两种方法，并以CTAB法为基础进行条件优化，进一步提高DNA纯度。采用该方法对6个不同品牌的市售大豆卵磷脂产品进行转基因成分(CAMV35S启动子及NOS终止子)检测，结果证实均不含转基因成分。关键词大豆卵磷脂，DNA提取，实时荧光PCR大豆卵磷脂(soybeanlecithin，又称大豆蛋黄素)，是精制大豆油过程中的副产品。大豆卵磷脂中含有卵磷脂、脑磷脂、心磷脂等，具有延缓衰老、预防心脑血管疾病等作用。根据我国的转基因食品标识管理规定，当大豆卵磷脂原料来自转基因大豆时，需要进行转基因标识。深加工食品的检测中，DNA的提取是难点之一‘。由于深度加工使原料DNA在加工过程中遭到严重破坏，加工中出现的某些物理、化学变化或酶因子变化也会影响DNA质量，因此，如何从深加工食品中提取高质量的DNA，成为转基因食品检测成功与否的关键所在。深加工食品DNA的提取方法包括经典的CTAB法、SDS法以及试剂盒方法，常用的试剂盒如Pro—mega、Sigma、Invitrogen、TaKaRa、Whatman等。近年来国内外许多研究者针对不同种类的加工食品和不同的方法进行了比较。例如陈文炳等利用异丙醇浓缩提取法从贝奇野菜汁、统一鲜橙多与超浓缩橙汁提取DNA。沈夏艳等比较了简易法、试剂盒法以及改良试剂盒法，发现改良试剂盒法提取的苹果汁DNA质量较高，可用于RAPD技术分析。韩建勋。等采用多种CTAB法和磁珠试剂盒法提取果汁DNA，并对DNA的纯度、浓度及PCR扩增情况进行比较。白立群等建立了大豆油的冷冻干燥一丙烯酰胺DNA提取法。黄昆仑等利用LH—SmartDNA试剂盒提取大豆原料及其产品DNA，用巢式和半巢式PCR进行检测，可以从大豆油、酱油、面酱、大豆磷第一作者：硕士(陈颖研究员为通讯作者)。转基因重大专项课题(2008ZX08012—001)；国家863计划(2011AA1008047)收稿日期：2011一O3—23，改回日期：2011一O4—14脂、豆腐、豆浆等食品原料和深加工食品的l7个品牌的食品中检测出大豆内标基因。张明辉等利用三重巢式PCR对大豆深加工产品(卵磷脂、大豆蛋白质粉、巧克力饮品、婴儿米粉、大豆粗油、大豆精炼油和大豆色拉油)进行定性检测，发现可扩增出除大豆精炼油和色拉油以外的所有深加工产品的内源基因Lectin、35S-CTP和EPSPS—NOS基因，其检测灵敏度达到0．005％。敖金霞⋯等发现利用五重巢式PCR可对商品化的转基因大豆、水稻、玉米深加工产品进行定性检测。Angela等”发现WizardMagnetic方法对蔬菜食品提取效率更高，DNeasy对复合食品及加工食品提取效率更高。IsabelMalta等¨以大豆、豆粉、豆汁、酱油、大豆分离蛋白、豆腐、大豆甜点、含大豆的蔬菜食品等为样品，比较NucleoSpin试剂盒、GeneSpin试剂盒，CTAB法和Wizard方法，发现对于豆粉、大豆分离蛋白、豆腐，NucleoSpin、GeneSpin试剂盒方法最好，Wizard方法其次，均优于CTAB法，对于大豆饮品、甜点和含大豆的素食，CTAB法和Wizard方法提取效果较好。大豆卵磷脂是一种重要的大豆深加工食品，随着功能性食品越来越受到消费者关注，相关的质量安全监管工作越来越重要。目前有关大豆卵磷脂转基因检测的报道还不多，随着技术的发展，对检测方法的指标提出更高要求，因此十分有必要对该类产品进行转基因成分检测方法研究，而首要任务是建立有效的DNA提取方法。本文以大豆卵磷脂作为研究对象，对CTAB法、磁珠试剂盒法以及硅胶膜试剂盒法等进行比较和优化，建立了适用于大豆卵磷脂的DNA提取方法1材料与方法1．1材料20¨年第37卷第9期(总第28,5期FOODANDFERMENTAT10N1NDUSTRIES1．1．1样品健百特牌大豆卵磷脂软胶囊、自然之宝牌大豆卵磷脂软胶囊、瑞莱牌大豆卵磷脂软胶囊、渔夫堡牌大豆卵磷脂软胶囊、奈氏力斯牌大豆卵磷脂软胶囊、奥诺康牌大豆卵磷脂软胶囊，以上试验样品均购自北京超市。1．1．2PCR扩增引物及探针表1引物及探针序列1．1．3试剂及仪器三氯甲烷、异丙醇购于北...