1．1DNA重组技术的基本工具课标领航1．了解限制酶及DNA连接酶的来源。2．掌握限制酶及DNA连接酶的作用。3．理解载体需具备的条件。【重点】三种工具的作用。【难点】黏性末端和平末端；载体的特点。转基因夜光猫美国新奥尔良奥德班濒危物种研究中心为探索一些人类疾病的治疗方法，以猫为实验对象(猫的基因构成与人类相似)进行了一系列实验。为了了解外源基因是否可情景导航以安全地移植到猫科动物的基因序列中，该研究中心利用基因工程技术培育出美国首只转基因夜光猫。紫外线灯光下夜光猫的眼睛、牙床和舌头会发出鲜艳的橙黄色的荧光。夜光猫的培育施工是在DNA分子水平上进行的，在微小的DNA分子上进行的操作，需要专门的工具。这些工具是什么？各自的作用是什么？让我们一起来了解一下吧！核心要点突破基础自主梳理知能过关演练1．1DNA重组技术的基本工基础自主梳理一、基因工程的概念1．基因工程的别名：DNA重组技术。2．操作环境：生物体外。3．操作对象：______。4．操作水平：_______________。5．基本过程：________________________。6．结果：人类需要的新的生物类型和生物产品。基因DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达1．限制性核酸内切酶——“分子手术刀”(1)主要来源：______生物。(2)特点：①能够识别DNA特定的____________②切开两个核苷酸之间的____________(3)DNA末端：限制性核酸内切酶切割DNA产生的DNA末端有两种形式为__________和_______。核苷酸序列磷酸二酯键黏性末端原核平末端2．DNA连接酶——“分子缝合针”(1)作用：将双链DNA片段缝合起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的___________。(2)种类①E.coliDNA连接酶：只能缝合双链DNA的_____________。②T4DNA连接酶：既可缝合双链DNA的黏性末端，又可缝合双链DNA的________。磷酸二酯键黏性末端平末端思考感悟限制酶和DNA连接酶作用的位点相同吗？【提示】相同。都是磷酸二酯键。3．基因进入受体细胞的载体——“分子运输车”1载体的种类①质粒：是一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有_________能力的双链环状DNA分子②λ噬菌体的衍生物③动植物病毒自我复制2质粒载体的特点①能够在细胞内自我复制②具有一个或多个__________________，便于供外源DNA插入③具有特殊的标记基因，供重组DNA的鉴定和选择(3)质粒载体的处理：真正用作载体的质粒，都必须在细胞外经人工改造。限制酶切割位点核心要点突破利用图解法理解记忆限制酶的有关问题1．识别序列的组成大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成，例如EcoRI、SmaI限制酶的识别序列，也有少数限制酶的识别序列由4、5或8个核苷酸组成。2．限制酶都是切割识别特定的核苷酸序列的两个核苷酸之间的磷酸二酯键。3．限制酶切出的黏性末端和平末端的区别：(2011年雅礼中学高二检测)基因工程中，须使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是－G↓GATCC－，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是－↓GATC－。根据图示判断下列操作正确的是()例例11A．目的基因和质粒均用限制酶Ⅱ切割B．目的基因和质粒均用限制酶Ⅰ切割C．质粒用限制酶Ⅱ切割，目的基因用限制酶Ⅰ切割D．质粒用限制酶Ⅰ切割，目的基因用限制酶Ⅱ切割【尝试解答】D【解析】首先把目的基因切下来要用到限制酶Ⅱ；如果再用限制酶Ⅱ切割质粒，则2个标记基因都被切开，标记基因将失去作用。而用限制酶Ⅰ切割质粒可保留一个标记基因，而产生的黏性末端和限制酶Ⅱ切割下来的目的基因可以互补配对。【互动探究】上题中限制酶Ⅰ切开化学键后产生哪种类型的末端？【提示】黏性末端。【易误警示】(1)限制性核酸内切酶是一类酶而不是一种酶。(2)限制性核酸内切酶作用的化学键为磷酸二酯键，而不是氢键。(3)不同种类的限制性核酸内切酶识别与切割的位点不同，这与酶的专一性是一致的。与DNA有关的各种酶比较名称作用参与生理过程应用作用位点(如图)DNA连接酶连接两个DNA片段基因工程a限制性内切酶切割某种特定的脱氧核苷酸序列aDNA聚合酶在脱氧核苷酸链上添加单个脱氧核苷酸DNA复制a名称作用参与生理过程应用...
