编号：FAL-YZ-003.1无菌检查方法验证报告编制/日期审核/日期评审会签姓名部门职务评审意见日期批准/日期科技发展有限公司目录序号内容页号1目的12范围13依据14职责权限15验证方法26验证结论57附录61无菌检查方法验证报告1.目的通过对培养基无菌性检查、灵敏度检查，对产品的无菌检查方法适用性进行试验，证明该方法适用于产品无菌检查日常检测。2.范围适用于本公司产品的无菌检查方法的建立和确认。3．依据中国药典（2015年版）GB/T14233.2-2005医用输液、输血、注射器具检验方法第2部分：生物学实验方法4.职责权限姓名部门分工职责组长：组织确认或验证工作，批准方案和报告负责编制方案、实施、总结报告及微生物检测负责设备样品提供,配合实施方案的工作负责微生物检测5.验证方法实验前的准备a仪器设备2设备名称设备编号证书编号设备状态压力蒸汽灭菌器10-11-53京海字第12004119号□未检定□己检定在有效期内激光尘埃粒子计数器Y09-3016H212C-O1040□未检定□己检定在有效期内温湿度计JWS-A3B812Z-A0571号□未检定□己检定在有效期内微压差表B10093624B712C-E0083号□未检定□己检定在有效期内微压差表B10090070B712C-E0076号□未检定□己检定在有效期内细菌培养箱SPX-100B-Z京海字第11042604号□未检定□己检定在有效期内霉菌培养箱MLX-150-1京海字第11042605号□未检定□己检定在有效期内确认人：日期：b操作环境微生物限度检查应在环境洁净度10000级下的局部洁净度100级的单向流空气区域内进行。检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。单向流空气区域、工作台面及环境应定期按《医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》的现行国家标准进行洁净度验证。c稀释液和试剂：PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液d器具无菌注射器仪液器YT－603集菌仪5.1培养基的适用性检查无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基及胰胳大豆胨肉汤培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。培养基：硫乙醇酸盐批号20140408生产厂家：青岛日水生物技术有限公司胰胳大豆胨肉汤培养基批号20151023生产厂家：青岛尼赛欣合生物技术有限公司35.1.1无菌性检查：每批培养基随机取不少于5支（瓶），培养14天，应无菌生长。5.1.2灵敏度检查菌种：培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0代），试验用菌种应采用适宜的菌种保存技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)〔CMCC(B)26003〕铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)〔CMCC(B)10104〕枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）〔CMCC（B）63501〕生孢梭菌(Clostridiumsporogenes)〔CMCC(B)64941〕白色念珠菌(Candidaalbicans)〔CMCC(F)98001〕黑曲霉(Aspergillusniger)〔CMCC(F)98003〕5.1.3菌液制备金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉微生物培养基质控品,使用前注入1.1ml稀释液充分溶解后,在漩涡混合器上震荡混匀,制成10-100cfu/0.1ml菌悬液,3-5天内用完。5.1.4培养基接种取每管装量为12ml的硫乙醇酸盐流体培养基7支，分别接种小于100cfu的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各2支，另1支不接种作为空白对照，培养3天；取每管装量为9ml的胰胳大豆胨肉汤培养基7支,分别接种小于100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各2支，另1支不接种作为空白对照，培养5天。逐日观察结果。45.1.5结果判定空白对照管应无菌生长，若加菌的培养基管均生长良好，判该培养基的灵敏度检查符合规定。见附件无菌培养基的适用性检查记录5.2无菌检查方法验证试验5.2.1当建立产品的无菌检查法时，应进行方法的验证，以证明所采用的方法适合于本产品的无菌检查。若本产品的组分或原检验条件发生改变时，检查方法应重新验证。验证时，按“中国药典2015版四部1101无菌检查法”的规定进行操作。对每一试验菌应逐一进行验证。5.2.2菌种及菌液制备金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉同培养基灵敏度检查。5.2.3薄膜过滤法5.2...
