自-荧光定量PCR中探针法与染料法的区别VIP专享VIP免费

荧光定量ＰＣR中探针法与染料法的区别:一、荧光定量PCＲ中探针法与染料法的描述:1.荧光定量ＰＣR探针法：探针法即除了引物外另外设置一个探针，在探针的两端分别带上发光集团和淬灭集团,这个时候,两个平衡不发光，但是当ＤNＡ通过引物合成的时候，探针被折断,释放出发光集团和淬灭集团,两个距离较远,发光集团产生荧光，被机器收集到信号,从而检测基因的量２、荧光定量PCRSYBＲGreｅn染料法:染料能够与双链结合，当ＰCR扩增的时候,染料结合到DＮA上，从而发光,单个的染料不发光，这样就能收集到信号,我们可以看出,染料法特异性不强，只要是双链的DNＡ都回结合发光。二、荧光定量PＣR中探针法与染料法的优缺点１、探针法通过探针可以增加反应收集信号的特异性，只有探针结合的片段上发生扩增才能收集到信号,能够用多重体系反应的方法,能够预测和提前进行反应条件的优化，缺点是要合成探针，成本高２、染料法经济实惠，可以做溶解曲线，分析全部PＣR产物的TM值,缺点就是特异性没有探针法好【分享】定量ｐcr仪选则宝典:各自精彩的选择如何选择合适的定量PＣR仪定量ＰCR仪主要由两部分组成，一个是ＰCR系统，一个是荧光检测系统。选择定量PＣR仪的关键——由于定量PＣR必需借助样本和标准品之间的对比来实现定量的，对于定量ＰＣR系统来说，重要的参数除了传统PＣR的温控精确性、升降温速度等等,更重要的还在于样品孔之间的均一性,以避免微小的差别被指数级放大。至于荧光检测系统，多色多通道检测是当今的主流趋势——仪器的激发通道越多，仪器适用的荧光素种类越多，仪器适用范围就越宽;多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光，仪器就可以同时检测单管内多模版或者内标＋样品,通道越多，仪器适用范围越宽、性能就更强大。荧光检测系统主要包括激发光源和检测器。激发光源有卤钨灯光源、氩离子激光器、发光二极管LEＤ光源,前者可配多色滤光镜实现不同激发波长,而单色发光二极管LEＤ价格低、能耗少、寿命长，不过因为是单色，需要不同的LED才能更好地实现不同激发波长。监测系统有超低温ＣCＤ成像系统和PMT光电倍增管，前者可以一次对多点成像，后者灵敏度高但一次只能扫描一个样品，需要通过逐个扫描实现多样品检测,对于大量样品来说需要较长的时间。定量PCR仪需要考虑的另外一个因素是软件设计,这一点目前较新型号的仪器都有不错的配套软件可以满足常规使用。——随着定量ＰCＲ技术在临床诊断、疾病监控、药物监测、肿瘤研究等领域的越来越广泛的应用，市面上不同品牌和设计的定量ＰCR仪也不断推陈出新,生物通在这里着重介绍不同的3类定量ＰCR仪，各有各精彩。1．传统的9６孔板式定量PCR仪传统的９６孔板式定量ＰCR仪以美国应用生物系统公司（ABI)为代表。传统96孔板式定量PCR仪的优点是可容纳的样本量大而且无需特殊耗材，可以采用传统的９６孔板甚至38４孔板进行批量的定量反应，但是缺点也显而易见——温度均一性不佳——平板固定加热模块的PＣＲ温度控制有边缘效应——样品槽上每个孔之间的温度存在差异——也就是所谓位置效应,因此标准曲线的反应条件应难以做到与样本完全一致,样本和样本之间的温度控制也可能存在差异,对于灵敏度极高的定量ＰCＲ来说,任何极微小的差异都会以指数级别的规模被放大,不能不说是一种缺憾。传统反应板面积大,温度控制的精确性、升降温速度也相对较慢，因而反应速度也较慢。9６孔板定量PＣR仪的荧光检测分析系统，由于96孔板上样品孔的位置是固定的，每个样品孔距离光源和监测器的光程各不相同,有可能对结果产生影响。检测在试管管底进行,试管底的透光性和厚薄均一性都可能对结果产生影响。ＭJ和Ｂｉo－Red公司的定量PCR仪也属于这一类。ABI的7５00型荧光定量PCＲ仪激发光源为卤钨灯光源,5色滤光镜,可同时激发96个样品,超低温CＣD具备同时多点多色检测的能力，能够有效地分辨ＦAM/SYＢRGreenI,VIＣ／JOE,ＮED／TＡMRＡ/Cｙ3,ＲOX／ＴexasRed,和Cｙ5等荧光染料。多色荧光检测技术为多重定量、SNP分析、基因型分型和带阳性内对照的阴／阳性分析提供了基础。多重定量即在同一反应管内同时对多个目标基因进行定量,可以大大提高精度并节约成本。随机配置...