选修一第5章提取技术知识复习总结1/4生物技术实践第五章提取技术第一节DNA的提取提取DNA的溶解性原理DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精，但细胞中蛋白质可溶于酒精。在0.14mol/L时溶解度最小；较高浓度（2mol/L）可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。DNA的鉴定方法在沸水浴条件下，DNA遇二苯胺呈现蓝色提取DNA的实验过程［DNA的溶解和释放］动物细胞：向鸡血细胞中加入蒸馏水（血液中加入柠檬酸钠防止凝固），同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液（搅拌应快速，加速血细胞破裂）植物细胞：切碎，加入洗涤剂和食盐，进行充分搅拌和研磨，过滤收集研磨液。［DNA的纯化］加入NaCl调节浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，加蒸馏水调节NaCl溶液溶解DNA；在滤液中加入嫩肉粉，反应10-15min；将滤液放在60-75℃恒温水浴箱中保温10-15min［DNA的析出］加入与滤液体积相等的、冷却的体积分数为95%的酒精溶液，静置2-3min；用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸取上面的水分（加入酒精和搅拌时的动作要轻缓，以免加剧DNA分子的断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀）［DNA的鉴定］沸水浴条件下，DNA与二苯胺反应呈现蓝色；取2支20mL试管各加入2mol/LNaCl溶液5mL，将丝状物放入其中一个试管中，搅拌使其溶解，各加入4mL二苯胺试剂，混匀后将试管置于沸水中加热5min，待试管冷却后，比较溶液颜色变化（二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定效果）选修一第5章提取技术知识复习总结2/4选择鸡血细胞作为实验材料的原因（1）鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；（2）鸡血细胞极易吸水胀破。去除滤液中的杂质的方法高浓度的NaCl溶液溶解细胞核内的DNA；加蒸馏水降低NaCl溶液的浓度，使DNA析出、过滤；将DNA丝状物再溶解、过滤。DNA纯化的方法滤液中加入体积分数为95%的冷酒精溶液进行提纯DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响洗涤剂能瓦解细胞膜温度为60-80℃，蛋白质变性沉淀，而DNA不会变性。第二节血红蛋白的提取和分离凝胶色谱法的依据蛋白质相对分子质量的大小凝胶色谱法的原理分子量大的分子通过多孔凝胶颗粒的间隙，路程短，流动快；分子量小的分子穿过多孔凝胶颗粒内部，路程长，流动慢。缓冲溶液的组成和作用组成：弱酸和相应的强碱弱酸盐（如H2CO3-NaHCO3,NaH2PO4-Na2HPO4等），调节酸和盐的用量，可配制不同pH的缓冲液。作用：抵制外界酸、碱对溶液pH的干扰而保持pH稳定。电泳法的原理不同蛋白质的带点性质、电量、性状和大小不同，在电场中受到的作用力大小、方向、阻力不同，导致不同蛋白质在电场中的运动方向和运动速度不同。选修一第5章提取技术知识复习总结3/4电泳法的分离方法琼脂糖凝胶电泳、聚丙烯酰胺凝胶电泳血红蛋白的纯化方法：凝胶色谱法分离凝胶色谱法分离蛋白质的洗脱顺序相对分子质量大的蛋白质先流出，相对分子质量小的蛋白质后流出血红蛋白的纯度鉴定方法：SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳第三节植物有效成分的提取植物芳香油可来源于动物、植物与真菌；具有很强的挥发性，易溶于有机溶剂；主要包括萜类化合物及其衍生物。芳香油的提取方法［水蒸气蒸馏法］（1）原理：水蒸气可将挥发性较强的芳香油携带出来形成油水混合物，冷却后水油分层。（2）方法：水中蒸馏；水上蒸馏；水汽蒸馏。（3）不足：有些原料不适宜于水中蒸馏，如柑橘、柠檬等易焦糊，有效成分容易水解。［压榨法］（通过机械压缩力将液相物从液固两相混合物中分离出来的一种简单操作）：如柑橘、柠檬等易焦糊的材料。不足：分离困难，出油率低。［萃取法］（1）原理：芳香油易溶于有机溶剂，溶剂挥发后得到芳香油。如石油醚、酒精、乙醚等。（2）不足：有机溶剂中的杂志影响芳香油的品质。玫瑰精油的提取方法［实验步骤］鲜玫瑰花和清水（比例为1:4）→水蒸气蒸馏→油水混合物→分离油层→除水→玫瑰油［注意事项］1）蒸馏时间不能过短，温度不能过高。2）加入氯化钠：分离油层；无水硫酸钠：吸收油层中的水分。橘皮精油的提取方法选修一第5章提取技术知识复习总结4/4（1）石灰水浸泡：防止压榨时滑脱，提高出油率，降低压榨液黏稠度。（2）漂洗：浸...
