专题九现代生物科技专题考纲内容要求基因工程(1)基因工程的诞生(2)基因工程的原理及技术(3)基因工程的应用(4)蛋白质工程克隆技术(5)植物的组织培养(6)动物的细胞培养与体细胞克隆(7)细胞融合与单克隆抗体(8)动物胚胎发育基本过程与胚胎工程的理论基础(9)胚胎干细胞的移植(10)胚胎工程的应用ⅠⅡⅡⅠⅡⅠⅡⅠⅠⅡ考纲内容要求转基因生物安全(11)转基因生物的安全性(12)生物武器对人类的威胁(13)生物技术中的伦理问题生态工程(14)简述生态工程的原理(15)生态工程的实例ⅠⅠⅠⅡⅠ运载体基因重组提取目的基因全能性单克隆抗体制备受精早期胚胎培养卵裂期囊胚期限制酶DNA连接酶载体作用切割目的基因和载体拼接DNA片段,形成重组DNA携带目的基因进入受体细胞作用部位两核苷酸的脱氧核糖与磷酸之间形成的磷酸二酯键基因工程1.实质:在分子水平上利用特殊工具将特定基因转入受体细胞,使其产生所需性状
2.基本工具:限制酶DNA连接酶载体作用特点(条件)①识别特定的核苷酸序列②在特定位点上切割①E·coliDNA连接酶只能连接黏性末端②T4DNA连接酶能连接黏性末端和平末端①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制②有多个限制酶切割位点③具有特殊的标记基因常用类型EcoRⅠ限制酶SmaⅠ限制酶E·coliDNA连接酶、T4DNA连接酶质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒3
操作程序:(1)目的基因的获取:①目的基因:指编码蛋白质的结构基因
②途径:a.从基因文库中获取
b.人工合成:化学合成法、反转录法
c.利用PCR技术扩增
(2)基因表达载体的构建:①目的:使目的基因在受体细胞中稳定存在,遗传给下一代;使目的基因能够表达和发挥作用
②组成:目的基因+启动子+终止子+标记基因(常用抗生素基因)
(3)将目的基因导入受体细胞:生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射法Ca2