专题九现代生物科技专题考纲内容要求基因工程(1)基因工程的诞生(2)基因工程的原理及技术(3)基因工程的应用(4)蛋白质工程克隆技术(5)植物的组织培养(6)动物的细胞培养与体细胞克隆(7)细胞融合与单克隆抗体(8)动物胚胎发育基本过程与胚胎工程的理论基础(9)胚胎干细胞的移植(10)胚胎工程的应用ⅠⅡⅡⅠⅡⅠⅡⅠⅠⅡ考纲内容要求转基因生物安全(11)转基因生物的安全性(12)生物武器对人类的威胁(13)生物技术中的伦理问题生态工程(14)简述生态工程的原理(15)生态工程的实例ⅠⅠⅠⅡⅠ运载体基因重组提取目的基因全能性单克隆抗体制备受精早期胚胎培养卵裂期囊胚期限制酶DNA连接酶载体作用切割目的基因和载体拼接DNA片段，形成重组DNA携带目的基因进入受体细胞作用部位两核苷酸的脱氧核糖与磷酸之间形成的磷酸二酯键基因工程1．实质：在分子水平上利用特殊工具将特定基因转入受体细胞，使其产生所需性状。2．基本工具：限制酶DNA连接酶载体作用特点(条件)①识别特定的核苷酸序列②在特定位点上切割①E·coliDNA连接酶只能连接黏性末端②T4DNA连接酶能连接黏性末端和平末端①能在宿主细胞内稳定存在并大量复制②有多个限制酶切割位点③具有特殊的标记基因常用类型EcoRⅠ限制酶SmaⅠ限制酶E·coliDNA连接酶、T4DNA连接酶质粒、λ噬菌体的衍生物、动植物病毒3.操作程序：(1)目的基因的获取：①目的基因：指编码蛋白质的结构基因。②途径：a．从基因文库中获取。b．人工合成：化学合成法、反转录法。c．利用PCR技术扩增。(2)基因表达载体的构建：①目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。②组成：目的基因＋启动子＋终止子＋标记基因(常用抗生素基因)。(3)将目的基因导入受体细胞：生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常用方法农杆菌转化法显微注射法Ca2＋处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程目的基因插入Ti质粒的T－DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA→表达目的基因表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子(4)目的基因的检测和鉴定：类型检测内容方法结果显示分子水平检测目的基因是否插入受体细胞染色体的DNA上DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间)是否显示出杂交带是否转录出mRNA分子杂交技术(DNA和mRNA之间)同上是否翻译出蛋白质抗原－抗体杂交同上个体水平鉴定包括抗虫或抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性程度；基因工程产品与天然产品进行活性比较，以确定功能是否相同等【典例1】(2012年浙江高考)天然的玫瑰没有蓝色花，这是由于缺少控制蓝色色素合成的基因B，而开蓝色花的矮牵牛中存在序列已知的基因B。现用基因工程技术培育蓝玫瑰，下列操作正确的是()A．提取矮牵牛蓝色花的mRNA，经逆转录获得互补的DNA，再扩增基因BB．利用限制性核酸内切酶从开蓝色花矮牵牛的基因文库中获取基因BC．利用DNA聚合酶将基因B与质粒连接后导入玫瑰细胞D．将基因B直接导入大肠杆菌，然后感染并转入玫瑰细胞[名师点拨]提取矮牵牛蓝色花的mRNA，逆转录得到DNA，然后扩增，可获得大量的基因B，A正确；从基因文库中获取目的基因，只要根据目的基因的相关信息和基因文库中的信息进行筛选对比即可，不需要用限制酶进行切割，B错误；目的基因与质粒的连接需要用DNA连接酶，而不是DNA聚合酶，C错误；目的基因需要和运载体连接形成重组质粒后再导入，而且应该用农杆菌进行感染玫瑰细胞，而不是大肠杆菌，D错误。[答案]A【典例2】(2012年全国新课标)根据基因工程的有关知识，回答下列问题。(1)限制性内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有__________和__________。(2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下：AATTC……GG……CTTAA为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性内切酶切割，该酶必须具有的特点是_____________________________。(3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和____________DNA连接酶。(4)反转录过程的...
