基因工程的一般过程与技术VIP免费

专题1基因工程1.2基因工程的基本操作程序1、简述基因工程基本操作程序，以及各步骤的一般方法、原理2、模拟重组DNA分子的操作过程——学习目标————考情分析——考查内容等级要求五年考情分析基因工程的原理及技术B2017年T33(8分)2016年T33(9分)2015年T32(4分)、T33(3分)2014年T23(3分)2013年T22(3分)——基础回顾——1、基因工程的基本操作步骤包括：①__________________②__________________③__________________④__________________2、获取目的基因的方法包括：______、______、_____等。3、PCR技术扩增目的基因的过程包括：_____、_____、_____。4、基因表达载体的组成包括：____、____、____、____、___。种类部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库基因组文库：含有一种生物的全部基因——基因文库——（1）基因组文库的构建提取某生物全部DNA用适当限制酶切割许多DNA片段与载体连接导入受体菌群该生物基因组文库（2）cDNA文库的构建——mRNA反转录形成与载体连接导入受体菌群mRNA逆转录酶杂交双链核酸酶单链DNADNA聚合酶双链DNA(cDNA)该生物cDNA文库——基因文库的构建——模板DNA90-95℃——PCR反应动态演示——PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点55-60℃引物1引物2DNA引物PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点引物1引物270-75℃Taq酶Taq酶PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点第1轮结束第2轮开始70-75℃PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点90-95℃55-60℃70-75℃TaqTaqTaqTaqPCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点70-75℃第2轮结束变性90-95˚C延伸70-75˚C退火55-60˚C——PCR的基本反应步骤——2、引物之间不能有太多的互补序列。1、引物序列不能太长。——引物的设计——3、引物自身不能有太多的互补序列。——PCR反应原理示意图——DNA复制PCR技术相同点原则原料条件不同点场所解旋方式酶特点结果碱基互补配对四种脱氧核苷酸模板、能量、引物高温变性解旋解旋酶催化解旋体外主：细胞核内热稳定的DNA聚合酶DNA聚合酶等形成大量的DNA片段形成完整DNA分子边解旋边复制先解旋后复制——DNA复制与PCR技术的比较——启动子、终止子的位置要注意什么？——基因表达载体的模式图——2、启动子、终止子与转录过程相关，起始密码子、终止密码子与翻译过程相关。1、启动子、终止子均是DNA序列，起始密码子、终止密码子均是mRNA序列。—启动子、终止子与起始密码子、终止密码子—（从本质、功能两方面）——基因表达载体的构建过程——弊端：易造成目的基因和质粒的自身环化和随意连接（正向、反向）。改进：选择两种限制酶切割（双酶切法）——问题延伸——怎么选择限制酶？1、两种限制酶切割形成的末端要不同。2、切割时不能破坏目的基因。3、切割时不能破坏质粒上的重要结构。例如：启动子、终止子等。1、目的基因的获取从基因文库获取利用PCR技术扩增化学方法人工合成2、基因表达载体的构建目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点——课堂小结——