课题2-土壤中分解尿素的细菌的分离与计数VIP免费

课题背景【P21】1、尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。2、细菌能分解利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成.CO(NH2)2脲酶+H2O+CO22NH3脲酶3、课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌一.研究思路㈠.筛选菌株㈡.统计菌落数目㈢.设置对照1、实例：PCR技术启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物，只有Taq细菌被筛选出来。DNA多聚酶链式反应(PCR)是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。㈠.筛选菌株去哪儿寻找？美国黄石国家公园热泉要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；方法：⑴抑制大多数微生物的生长⑵促进目的菌株的生长结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。2、实验室中微生物的筛选原理：【P21-22】人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNa2HPO41.4gKH2PO43、分解尿素的细菌所需培养基【P22】：无机盐碳源氮源凝固剂分析培养基回答下面问题①在此培养基中哪些作为碳源、氮源？15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNa2HPO41.4gKH2PO43、分解尿素的细菌所需培养基【P22】：无机盐碳源氮源凝固剂分析培养基回答下面问题②此培养基对微生物是否有选择作用？若有，怎样选择？该培养基以尿素作唯一氮源，只有能合成脲酶的微生物才能利用尿素生长繁殖。其他微生物由于缺乏氮源而受抑制。15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNa2HPO41.4gKH2PO43、分解尿素的细菌所需培养基【P22】：无机盐碳源氮源凝固剂分析培养基回答下面问题③从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基4、选择培养基概念允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。1.稀释涂布平板法（统计活菌）每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。㈡.统计菌落数目：⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个活菌繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个活菌计算公式：每克样品中的菌株数=（C÷V）×M某同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每克样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1ml）()A.2.34×108B.2.34×109C.234D.23.4B1.稀释涂布平板法（统计活菌）㈡.统计菌落数目：⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个活菌繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个活菌（2）操作提示：①准确统计的关键：选择合适的稀释度。②一般选择菌落数在30—300的平板上计数。评价学生统计结果第一位同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，没有说服力。应该在同一稀释度下设置至少3个平板，取其平均值作为结果。第二位同学其中1个平板的结果与另2个相差太远，意味着操作有误，不能将3个平板的数值用来求平均值，需要重新实验。1.稀释涂布平板法（统计活菌）㈡.统计菌落数目：（2）操作提示：①准确统计的关键：选择合适的稀释度。②一般选择菌落数在30—300的平板上计数。③同一稀释度下设置3个或3个以上的平板作重复组，以菌落平均数作为结果。④若所设置重复组的结果差距太大，意味着操作有误，需要重新实验。⑤需用固体培养基思考稀释涂布平板法统计的菌落数与实际活菌数有差距吗？若有，偏大还是偏小1.稀释涂布平板法（统计活菌）答：统计的菌落往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上只观察到一个菌落。2、显微镜直接计数：利用血球计数板(血细胞计数板），在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。㈡.统计菌落数目：①不能区分细菌死活；②不适合对运动细菌...