专题三植物的组织培养技术专题三植物的组织培养技术课题课题22月季的花药培月季的花药培养养知识回顾•单倍体育种的过程？花药离体培养（N）单倍体植株（N）秋水仙素处理，使染色体翻倍植株（2N）优点：1明显缩短育种年限2后代植株都为纯合子。正常植株（2N）桃花的基本结构示意图花柄花托萼片花瓣子房花柱柱头花丝花药雄蕊雌蕊花蕊（花冠）（花萼）132547689（内有花粉）（内有胚珠）（一）被子植物的花粉发育（一）被子植物的花粉发育一、基础知识花粉的概念:由花粉母细胞经过减数分裂形成的单倍体的生殖细胞.1花粉母细胞（2n）4个小孢子(小孢子四分体)（n）减数分裂有丝分裂1个花粉管细胞核（n）1个生殖细胞核（n）有丝分裂2个精子（n）单核居中期（n）单核靠边期（n）被子植物花粉的发育过程营养细胞（n）生殖细胞（n）受精作用（二）产生花粉植株的两种途径（二）产生花粉植株的两种途径①②移栽花药中的花粉胚状体脱分化愈伤组织花药中的花粉脱分化分化丛芽再分化丛芽诱导生根体细胞胚（胚状体）：在组织培养过程中，某些细胞在形态上转变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过程亦与合子胚类似原因：培养基中的激素种类及浓度配比部分花药通过胚状体途径形成小植株烟草花药培养胚状体发育途径愈伤组织转接种到再生培养基愈伤组织分化形成再生植株水稻花药培养愈伤组织发育途径部分花药产生愈伤组织接种在平板上的水稻花药（单核居中期与靠边期之间）（一般选月季的初花期）•1、材料的选择•不同植物的诱导成功率不同.•同一植物的不同生理状况也对诱导成功率有直接的影响.•合适的花粉发育期•2、培养基的组成（MS培养基+不同比例的植物生长调节激素）•此外，植株生长条件、材料低温预处理、接种密度等(三)、影响花药培养的主要因素注意：选择最合适的花粉发育时期:单核期①不选择单核期之前花药原因：花药质地幼嫩，容易破碎；②不选择单核期之后花药原因：花瓣开始松动，给材料消毒带来困难困难；③挑选单核期花药方法：应当选择完全未开放的花蕾，微生物少，易消毒。实验操作一、材料的选取二、材料的消毒三、接种和培养（一）材料选取2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色)焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。1、从花药看：月季的初花期从花粉看：单核期从花蕾看：完全未开放的花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎，盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上→焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成蓝黑色）（二）材料的消毒无菌水冲洗3～5次花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒无菌水清洗无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟（质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）（三）接种和培养1灭菌后花蕾，要在下除去萼片和花瓣，并立即将花药接种到培养基上。3通常每瓶接种花药，温度控制在左右，。幼小植株形成后才。2在剥离花药时，要尽量（否则接种后，容易从受伤部位产生二倍体的愈伤组织），同时还要彻底，因为与花丝相连的花药不利于愈伤组织或胚状体的形成。一般经过20-30天培养后，会发现花药开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。将愈伤组织及时转移到分化培养基上，以便进一步分化出再生植株。4进一步鉴定和筛选：常常会出现染色体倍性的变化无菌条件不损伤花药去除花丝7-10个25℃不需要光照需要光照主要原因是花粉管核和生殖核融合造成的课题成果评价•一选材是否恰当一选材是否恰当•二无菌技术是否过关二无菌技术是否过关•三接种是否成功组织培养技术的应用植物组织培养技术与花药培养技术的比较项目植物组织培养花药培养技术相同点1培养基配制方法、无菌技术及接种操作等基本相同。2都经过了脱分化不同点1离体培养的外植体为体细胞。2有丝分裂的过程，染色体数量不变。1花粉是生殖细胞，得到的单倍体植株，弱小且高度不育。2秋水仙素处理，染色体加倍，恢复正常的染色体数，为纯种纯种。练习：小麦高杆（D）对矮杆（...
