学习必备欢迎下载专题二微生物的培养与应用知识点2.1微生物的实验室培养1．培养基是人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。2.培养基按物理性质分为液体培养基（应用于工业或生活生产）、固体培养基（应用于微生物的分离和鉴定）和半固体培养基（常用于观察微生物的运动及菌种保藏等）。按成分分为合成培养基（用成分已知的化学物质配制而成，成分种类比例明确，用于微生物的分离鉴定）和天然培养基（用化学成分不明的天然物质配制而成，用于实际工业生产）。按用途分为选择培养基（加入某种化学物质，以抑制不需要微生物生长，促进所需微生物的生长）和鉴别培养基（根据微生物的特点，加入某种指示剂或化学药品，来鉴别不同类别的微生物）。3.培养基的化学成分包括：水、无机盐、碳源、氮源和生长因子等。碳源包括CO2、NaHCO3等无机碳源和糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。异养微生物只能利用有机碳源。单质碳不能作为碳源。氮源包括N2、NH3、NO3-、NH4+等无机氮源和蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨等有机氮源。只有固氮微生物才能利用N2。4.培养基还需满足pH、特殊营养物质和氧气的要求。例：培养乳酸杆菌需添加维生素；培养霉菌需将pH调至酸性；培养细菌需将pH调至中性或微碱性；培养厌氧型微生物需提供无氧的条件。5.无菌操作技术包括：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。②将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。③为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。6.消毒与灭菌的区别是：消毒指使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子），包括煮沸消毒法，巴氏消毒法（酒精、氯气、石炭酸）和紫外线消毒法。灭菌指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子，包括灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。7.灭菌方法：①接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；②玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；③培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅；④表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。8.制作牛肉膏蛋白胨固体培养基（1）方法步骤：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板。（2）倒平板操作的步骤包括：①将灭过菌的培养皿放在酒精灯火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。②将锥形瓶的瓶口迅速通过火焰（灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基）。③将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，再将锥形瓶中的培养基（约10～学习必备欢迎下载20mL）倒入培养皿，立即盖上培养皿的皿盖。④等待平板冷却凝固然后，将平板倒过来放置，使培养皿盖在下、皿底在上（目的：使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染）。9.倒平板时若不慎将培养基溅在皿盖与皿底上，则这个平板不能用来培养微生物，原因是空气中的微生物会在皿盖与皿底上生长。10.纯化大肠杆菌的原理是：用平板划线法和稀释涂布平板法接种，使聚集在一起的微生物分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落（生态学上称种群），以达纯化菌种的目的。11.平板划线操作时第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环的原因是：前者避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，后者杀死上次划线残留在环上的菌种，使菌种逐渐变少以便得到单个菌落。在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环的原因是及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是避免接种环温度太高而杀死菌种。12.涂布平板操作的步骤包括：①将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。②取少量菌液，滴加到培养基表面。③将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8～10s。④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。13.菌种的保存：频繁使用，临时保存接种到固体斜面培养基，在4℃下保存。长期保存菌种用甘油管藏...
