微生物的培养与应用要点1.微生物、培养基的基础知识2.无菌技术3.平板划线法和稀释涂布平板法的比较一、培养基的制备1.基本成分（1）碳源：提供碳元素的物质，如CO2、NaHCO3、糖类、脂肪酸、石油、花生粉饼等。（2）氮源：提供氮元素的物质，如N2、NH3、氨盐、硝酸盐、尿素、牛肉膏、蛋白胨等。（3）水：细胞生命活动必不可少的物质，主要来源于培养基、大气、代谢产物。（4）无机盐：提供除碳、氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素的物质，主要来源于培养基、大气。【方法点拨】不同种类的微生物对培养基中营养物质的需求不同(1)自养型微生物所需的主要营养物质是无机盐，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。(2)异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要是由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。2培养基种类（1）按物理性质分（是否加凝固剂琼脂）培养基、培养基、培养基（2）按化学成分分天然培养基：含化学成分不明的天然物质合成培养基：培养基成分明确或用一定化学物质配制(3)按用途分培养基：添加某物质，抑制杂菌生长，促进所需微生物的生长培养基：根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂3.配制原则(1)目的要明确：根据微生物种类、培养目的等确定配制的培养基种类。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：细菌为，放线菌为，真菌为。4．培养基的制备计算→称量→溶化→→倒平板液体固体半固体选择鉴别6.5～7.57.5～8.55.0～6.0灭菌【例题讲解】下表为某培养基的配方，下列叙述正确的是()成分蛋白胨葡萄糖K2HPO4伊红美蓝蒸馏水含量10g10g2g0.4g0.065g1000mLA.从物理性质看该培养基属于液体培养基，从用途看该培养基属于选择培养基B.该培养基中属于碳源的物质主要是葡萄糖，属于氮源的物质是蛋白胨C.该培养基缺少提供生长因子的物质D.该培养基调节合适的pH后就可以接种使用B【解析】没有凝固剂，为液体培养基，该培养基的营养成分齐全，但存在伊红、美蓝等鉴别物质，属于鉴别培养基，A项错误；该培养基中的蛋白胨既是唯一的氮源，也是碳源，而葡萄糖是绝大多数生物最常利用的碳源，B项正确；该培养基中存在的无机盐和蛋白胨中的某些物质可以看作是生长因子，C项错误；培养基调节完pH还要进行灭菌等操作后，才能使用，D项错误。二、无菌技术无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。无菌操作是培养微生物成功的关键！（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。1.主要方面2.消毒与灭菌的比较项目理化因素作用强度消灭微生物数量芽孢和孢子是否消灭消毒灭菌温和强烈部分微生物全部微生物不能能①煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min③化学药剂消毒法:用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源④紫外线30min消毒：照射前，可喷石炭酸或煤酚皂等消毒液加强消毒效果(1)消毒的方法：3.常用的消毒与灭菌的方法(2)灭菌的方法：①灼烧灭菌：接种环、接种针、试管口、瓶口②干热灭菌：玻璃器皿和金属用具③高压蒸气灭菌：100kPa、121℃下维持15-30min问题1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？还能有效避免操作者自身被微生物感染。问题2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿；（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管；（3）实验操作者的双手（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。实验操作举例（一）制备牛肉膏蛋白胨培养基1计算：根据配方比例，计算100mL培养基各成分用量。2称量：准确称取各成分。称取牛肉膏和蛋白胨时动作要迅速，目的是防止牛肉膏吸收空气中水分。3溶化：①加水加热熔化牛肉膏；②加入蛋白胨和氯化钠继续加热；③加入琼脂；④用蒸馏水定容到100mL。整个过程不断用玻棒搅拌，目的是防止琼脂糊底而导致烧杯破裂。4....
